重组人促红细胞生成素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及与自噬的关系

摘要

目的：本课题通过建立大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia reperfusion, I/R)模型，研究重组人促红细胞生成素（ recombinant human erythropoietin，rhEPO）对大鼠的心脏舒缩功能、血清心肌酶含量、心肌梗死面积、心肌组织中微管相关蛋白轻链3（microtubule associated protein light chain3，LC3）与Beclin1蛋白表达水平以及细胞超微结构的影响，旨在探讨rhEPO对大鼠心肌I/R损伤的保护作用及与自噬的关系，为rhEPO减轻心肌I/R损伤提供新的药物作用靶点。
　　方法：将80只SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）、缺血/再灌注组（I/R组）、rhEPO处理组（rhEPO组）、rhEPO+自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin)处理组（rhEPO+Rap组）和雷帕霉素处理组（Rap组）。通过结扎冠状动脉构建大鼠心肌I/R模型，术中监测心室内压等血流动力学指标；于再灌注后检测血清肌酸激酶（creatine kinase，CK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）的含量；采用伊文氏蓝-TTC法检测心肌梗死面积；以western blotting法检测自噬相关基因LC3、Beclin1的蛋白表达水平；透射电镜观察各组心肌细胞内自噬泡及超微结构。
　　结果：与Sham组相比，I/R组、rhEPO组、rhEPO+Rap组、Rap组心脏舒缩功能明显减弱，血清 CK、LDH含量增高，可见明显心肌梗死， LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达上升，透射电镜下可见心肌细胞内肌丝断裂与自噬泡；与 I/R组相比，rhEPO组、rhEPO+Rap组心脏舒缩功能明显改善，血清 CK、LDH含量减少，心梗面积缩小， LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达显著下降，未见自噬泡；与rhEPO组相比，rhEPO+Rap组及Rap组心脏舒缩功能明显减弱，血清CK、LDH含量增高，心梗面积增大， LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达显著上升，可见自噬泡；与rhEPO+Rap组相比，Rap组心脏舒缩功能明显减弱，血清CK、LDH含量增高，心梗面积增大， LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达显著上升。
　　结论：（1）大鼠心肌I/R损伤可导致明显心肌梗死、严重心脏舒缩功能严重减退；（2）大鼠心肌I/R损伤可明显激活心肌细胞自噬；（3） rhEPO对大鼠心肌I/R损伤具有显著保护作用，其机理可能与减少自噬有关。

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前言

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

2.1大鼠Ⅱ导联心电图变化

2.2各组大鼠不同时间血流动力学变化

2.3血清CK、LDH含量变化

2.4心肌梗死面积的变化

2.5心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1蛋白表达水平

2.6 TEM观察心肌细胞内超微结构与自噬泡

3讨论

3.1 I/R导致的心脏损伤

3.2自噬在心肌I/R损伤中的作用

3.3 rhEPO对I/R心脏的保护作用

结论

参考文献

文献综述: 自噬与心血管疾病

致谢

硕士期间发表的论文