MAPK信号通路在瘦素诱导小鼠巨噬细胞IL-1α表达中的作用

摘要

通过体外培养小鼠腹腔巨噬细胞(Peritoneal macrophages,PM),按瘦素(leptin)不同质量浓度和/或丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPK)特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组,分别收集培养细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定了上清液中的白介素1α(Interleukin-1α,IL-1α)水平,用免疫印迹(Western blot)方法测定细胞内磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)1/2、p-p38以及磷酸化Jun氨基末端激酶(phosphorylated Jun N-terminal kinases,p-JNK)的表达水平,用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测定IL-1α mRNA的表达.结果发现,瘦素能够剂量依赖性地诱导小鼠PM产生IL-1α,在瘦素质量浓度为75 ng/mL时,IL-1α表达至峰值,且为对照组的12.2倍.瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路,瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2.3、2.4和2.6倍.ERK1/2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1/2、p38蛋白磷酸化以及IL-1α mRNA增加,两者的联合作用可以强烈抑制IL-1α mRNA的表达.瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1/2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生IL-1α.