微RNA-543对过氧化氢诱导的人静脉内皮细胞氧化应激的影响

摘要

目的 探讨微RNA-543(miR-543)对过氧化氢(H2O2)诱导的人静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的影响.方法 将对数生长期的HUVECs随机分为对照组及100、200、300、400μmol·L-1 H2 O2组.对照组细胞于达尔伯克改良伊格尔培养基中常规培养;100、200、300、400μmol·L-1 H2 O2组细胞分别加入终浓度100、200、300、400μmol·L-1 H2 O2诱导培养;各组细胞培养3 h时采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性.另设inhibitor+H2 O2组和inhibitor-NC+H2 O2组.inhibitor+H2 O2组HUVECs转染miR-543 inhibitor后,再用300μmol·L-1 H2 O2诱导培养3 h;inhibitor-NC+H2 O2组HUVECs转染inhibitor-NC后,再用300μmol·L-1 H2 O2诱导培养3 h.取对照组、300μmol·L-1 H2 O2组、inhibitor+H2 O2组和inhibitor-NC+H2 O2组HUVECs,采用MTT法检测细胞活性,实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中miR-543水平,酶标仪法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平,Western blot法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、血栓调节蛋白(TM)、组织因子途径抑制因子(TFPI)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的相对表达量;双荧光素酶报告基因法检测HUVECs中荧光素酶活性.结果 与对照组比较,300μmol·L-1 H2 O2组、inhibitor+H2 O2组和inhibitor-NC+H2 O2组HUVECs细胞活性显著降低,miR-543相对表达量显著增高,SOD和GSH-Px活性、NO水平以及TM、TFPI、eNOS蛋白相对表达量显著降低,MDA水平及IL-1β、ICAM1和VCAM1蛋白相对表达量显著升高(P0.05).miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR组荧光素酶活性显著低于miR-543 mimic+pGL3-TFPI 3′-UTR mut组(P0.05).结论 抑制miR-543表达能够抵抗H2O2诱导的HUVECs损伤,提高细胞活性、抑制氧化应激和炎症因子水平,提高抗血栓能力.