补阳还五汤对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及机制

摘要

背景:
　　血管内皮细胞损伤是加重脑梗塞后脑损伤以及影响神经功能恢复的重要因素，脑缺血再灌注后大量氧自由基产生是内皮细胞损伤重要机制，补阳还五汤(BYHWD)，一个传统的中国中草药，大量研究表明其具有保护神经细胞功能，但能否减轻脑梗塞后内皮细胞损伤，促进脑梗塞后血管生成及其机制尚未完全阐述。
　　目的:
　　在这篇文章中，通过H2O2诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤，建立体外脑缺血再灌注后氧自由基损伤模型，研究BYHWD对血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。
　　方法:
　　采用MTT法检测HUVECs细胞活力，Hoechst33342/PI法检测细胞凋亡数，通过Western blot法检测凋亡蛋白Caspase-3蛋白的表达，观察BYHWD对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用;通过透射电镜观察线粒体形态，JC-1法检测线粒体膜电位(MMP)，观察BYHWD对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞线粒体的影响;通过检测细胞内ROS、超氧化物歧化物(SOD)及丙二醛(MDA)含量，观察BYHWD对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞抗氧化作用机制。
　　结果:
　　与H2O2组相比，BYHWD组(1mg/ml)细胞凋亡比例无明显差异(p＞0.05)，而BYHWD组(15，30mg/ml)均有显著差异(p＜0.01);与H2O2组相比，BYHWD组(30mg/ml)凋亡蛋白caspase-3表达量明显下降(p＜0.01);BYHWD组(30mg/ml)能够明显改善线粒体结构，能够改善MMP(p＜0.01)，能够减少细胞ROS的产生、增加SOD及减少MDA含量(p＜0.01)。
　　结论:
　　BYHWD能够明显减少H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡，能够逆转线粒体膜电位的下降及改善线粒体结构，有效的减少ROS的生成，增加SOD活性，降低MDA产生，表明BYHWD作用机制是通过调节氧自由基引起线粒体途径介导细胞凋亡。