微RNA-139-5p对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

摘要

目的 探讨微RNA(miR)-139-5p对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及可能的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测永生化胃黏膜上皮细胞GES1和胃癌细胞SGC-7901、AGS和BGC-823中miR-139-5 p的表达,Western blot法检测GES1、SGC-7901、AGS和BGC-823细胞中Wnt3a、β-catenin和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达.收集对数生长期胃癌细胞SGC-7901,待细胞贴壁生长融合度达50％ ～60％时将细胞分为miR-139-5p mimics组、miR-NC组和空白对照组,利用脂质体Lipofectamine 2000分别将miR-139-5 p mimics、阴性对照质粒转染至miR-139-5 pmimics组和miR-NC组SGC-7901细胞,空白对照组细胞不转染任何质粒.采用实时荧光定量PCR法检测3组SGC-7901细胞中miR-139-5p的表达,甲基噻唑基四唑法检测3组SGC-7901细胞活力,Transwell实验检测3组SGC-7901细胞侵袭能力,Western blot法检测3组SGC-7901细胞中Wnt3a、β-catenin和cyclin D1蛋白表达.结果 SGC-7901、AGS、BGC-823和GES1细胞中miR-139-5p相对表达量分别为0.15±0.02、0.62±0.06、0.50±0.05、1.24±0.14;SGC-7901、AGS和BGC-823细胞中miR-139-5p相对表达量显著低于GES1细胞(P<0.05),SGC-7901细胞中miR-139-5p相对表达量显著低于AGS、BGC-823细胞(P<0.05),AGS与BGC-823细胞中miR-139-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).空白对照组、miR-NC组和miR-139-5p mimics组SGC-7901细胞中miR-139-5p相对表达量分别为1.05±0.10、0.96±0.07、2.01±0.23;miR-139-5p mimics组SGC-7901细胞中miR-139-5p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组(P<0.05),空白对照组与miR-NC组细胞中miR-139-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).转染后72、96 h,miR-139-5p mimics组SGC-7901细胞活力显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05),空白对照组与miR-NC组SGC-7901细胞活力比较差异无统计学意义(P>0.05).空白对照组、miR-NC组和miR-139-5p mimics组穿膜细胞数分别为98.67±10.26、101.45±8.24、49.33±5.12;miR-139-5p mimics组穿膜细胞数显著少于空白对照组和miR-NC组(P<0.05),空白对照组与miR-NC组穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-139-5p mimics组SGC-7901细胞中Wnt3a、β-catenin和cyclin D1蛋白相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05),空白对照组与miR-NC组SGC-7901细胞中Wnt3a、β-catenin和cyclin D1蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 胃癌细胞中miR-139-5p表达下调,miR-139-5p可能通过阻断Wnt/β-catenin信号通路传导而抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖和侵袭,miR-139-5 p有望成为治疗胃癌的新靶点.