MicroRNA-218靶向神经元表达发育下调基因9对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

摘要

目的观察microRNA-218(miR-218)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌细胞SGC-7901,将对数生长期细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-218 mimics组,阴性对照组和miR-218 mimics组细胞分别转染阴性对照序列和miR-218 mimics,空白对照组细胞不进行转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测3组细胞中miR-218表达,细胞计数试剂盒-8检测3组细胞培养24、48、72、96 h时的增殖活性;平板细胞克隆形成实验检测3组细胞克隆能力;Transwell实验检测3组细胞侵袭能力;Western blot法检测3组细胞中神经元表达发育下调基因9(NEDD9)蛋白、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的表达。将SGC-7901细胞分为阴性对照组+NEDD93′非编码区(3′UTR)-Wt组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Wt共转入SGC-7901细胞)、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组(阴性对照序列、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞)、miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(miR-218 mimics、pCHECK2-NEDD93′UTR-Mut共转入SGC-7901细胞),常规培养48 h后收集各组细胞,采用发光检测仪测定各组细胞中荧光素酶活性,分析miR-218与NEDD9的靶向关系。结果与空白对照组和阴性对照组比较,miR-218 mimics组细胞中miR-218表达及培养24、48、72、96 h时细胞增殖抑制率显著升高(P0.05)。miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Wt组细胞中荧光素酶活性显著低于阴性对照组+NEDD93′UTR-Wt组、阴性对照组+NEDD93′UTR-Mut组和miR-218 mimics+NEDD93′UTR-Mut组(P0.05)。结论miR-218过表达胃癌细胞SGC-7901中NEDD9蛋白表达显著下调,microRNA-218可能通过靶向下调NEDD9表达而抑制SGC-7901细胞的增殖及侵袭能力。