人甲状腺刺激激素受体cDNA的克隆及真核表达载体的构建

摘要

目的 克隆人甲状腺刺激激素受体(Htshr)基因Cdna并构建其真核表达载体.方法 以人甲状腺组织Cdna为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增Htshr基因编码区的全部序列,克隆入Pgem-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切鉴定.结果 PCR扩增的特异性片段长度为2 337 bp,以此构建的Pgem-T-Htshr克隆载体,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析证实载体中带有Htshr基因编码区的目的片段,重组质粒pcDNA3.1-Htshr经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5 1000 bp和2 300 bp左右的2个条带,DNA序列分析显示与GenBank中的Htshr基因Cdna序列一致,证明Htshr基因已成功克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中.结论 成功构建了野生型pcDNA3.1-Htshr重组真核表达载体.