低剂量三氧化二砷对HepG2细胞p53基因转录水平的下调作用

摘要

目的: 探讨低剂量三氧化二砷(As 2O 3)对p53启动子转录活性的调节作用.方法: 确定p53启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增p53p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-p53p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并以不同浓度三氧化二砷刺激HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果: 成功克隆出614 bp的新的p53启动子,pCAT3-p53p和不同浓度的三氧化二砷(0.25 μmoL/L)瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的11.2倍,表明pCAT3-p53p具有强的启动子活性.选用0.25、0.5、2.5、5.0 μmol/L浓度的三氧化二砷刺激pCAT3- p53p转染的HepG2细胞,其CAT吸光度值分别为:0.076、0.186、0.149、0.119,CAT活性随着三氧化二砷浓度的倍增呈衰减趋势.结论: p53启动子有反式激活下游基因表达的活性,低剂量三氧化二砷对p53基因转录水平具有下调作用.