UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac的相互作用以及下调HepG2肝癌细胞中H3K9ac水平

摘要

目的:
　　研究UHRF2与组蛋白H3乙酰化（H3K9ac和K3K14ac）的相互作用及两者相互作用结合区域的鉴定。探讨UHRF2分别在正常细胞和癌细胞中对K3K9ac和H3K14ac的影响及其分子机制。
　　方法:
　　1.在HEK293、LO2和HepG2细胞中转染UHRF2，进行免疫荧光后，激光共聚焦检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位现象。再在上述细胞中转染UHRF2和空载质粒，采用免疫沉淀技术，研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac的相互作用。
　　2.通过双酶切鉴定UHRF2各缺失体质粒，将各缺失体质粒转染HEK293、LO2和HepG2细胞，进行免疫沉淀实验。研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac相互作用的结合区域。
　　3.通过免疫印迹和免疫组化化学方法检测内源性UHRF2、H3、H3K9ac和H3K14ac蛋白在HEK293、LO2和HepG2细胞中以及在肝癌和癌旁组织中的表达情况。
　　4.采用瞬时转染技术上调UHRF2蛋白，通过免疫印迹检测UHRF2在HEK293、LO2和HepG2细胞中对H3K9ac和H3K14ac影响。同时通过免疫组织化学检测肝癌标本中UHRF2蛋白水平的高低与H3K9ac和H3K14ac蛋白表达情况的相关性。
　　结果:
　　1.激光共聚焦实验结果显示：UHRF2与H3、H3K9ac和H3K14ac在HEK293、LO2和HepG2细胞内均有存在共定位现象。免疫沉淀实验结果表明:UHRF2与H3K9ac在上述细胞中相结合存在相互作用。
　　2.免疫沉淀实验结果表明:在HEK293、LO2和HepG2细胞中PHD结构域是UHRF2与H3K9ac相互作用的关键结合区域，此外在HepG2细胞中除了PHD结构域外，YDG结构域也是UHRF2与H3K9ac相互作用关键结合区域。
　　3.免疫印迹结果显示：H3K9ac和H3K14ac在HepG2肝癌细胞中高表达。免疫组织化学结果显示:UHRF2、H3K9ac和H3K14ac在肝癌组织中高表达。
　　4.Western blot结果表明：上调UHRF2后，在HEK293和LO2正常细胞中H3K9ac蛋白表达增多，而在HepG2肝癌细胞中H3K9ac蛋白表达减少。同时免疫组织化学结果表明：H3K9ac蛋白在高表达UHRF2的肝癌组织较低表达UHRF2的肝癌组织少。
　　结论:
　　UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。在HepG2肝癌细胞中，过表达UHRF2下调H3K9ac蛋白的表达水平。UHRF2调节H3K9ac的分子机制有待进一步研究。

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封面

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2实验结果

2.1 质粒鉴定及蛋白表达

2.2 UHRF2与H3、H3K9ac、H3K14ac在LO2和HepG2细胞中的定位

2.3 UHRF2与H3K9ac在HEK293、LO2和HepG2细胞内的相互作用

2.4 UHRF2与H3K9ac相互作用的结合区域测定

2.5 内源性UHRF2、H3K9ac and H3K14ac蛋白在不同细胞和组织中的表达情况

2.6 过表达UHRF2对组蛋白H3乙酰化水平的影响

2.7 在肝癌组织中UHRF2蛋白的高表达伴随着H3K9ac蛋白的低表达

3讨论

参考文献

文献综述: 组蛋白乙酰化修饰以及乙酰化酶抑制剂在癌症中的研究

致谢

攻读硕士学位期间发表及待发论文