表达鸡传染性支气管炎病毒SD/97/01株S1蛋白的重组杆状病毒的构建

摘要

采用BAC-TO-BAC杆状病毒表达载体系统构建了表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型毒株SD/97/01 S1蛋白的重组杆状病毒.含SD/97/01株S1基因的重组质粒pMDSD9701S1用BamH I和Sal I双酶切后,回收目的片段并克隆到杆状病毒转座载体pFASTBAC HTa中多角体基因启动子的下游,筛选出重组转座质粒pFASTSD9701S1并转化大肠杆菌DH10BAC后,获得重组穿梭质粒rBacmidSD9701S1.用重组穿梭质粒DNA转染昆虫Sf9细胞,获得了含SD/97/01 S1基因的重组杆状病毒rAcSD9701S1.重组病毒感染Sf9细胞后,用SDS-PAGE、Western blot和IFA对细胞表达产物进行检测和分析.结果表明:构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达SD/97/01的S1蛋白,该蛋白具有天然蛋白的抗原性.