抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体/人p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析

摘要

目的构建抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)重链可变区(VH)单域抗体/人p53四价功能域融合基因,并进行空间构象分析.方法选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p53四价功能域之间连接的linker.利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四价功能域融合基因,并在融合基因5'端和3'端引入SalⅠ与HindⅢ酶切位点,将融合基因克隆入pUC19载体中构建pUC19/IgG3/p53克隆载体.将抗人γ-Sm VH单域抗体克隆入pUC19/IgG3/p53载体中,构建抗人γ-Sm VH单域抗体/人p53四价功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后,利用计算机软件进行空间构象分析.结果获得了抗人γ-Sm VH单域抗体/人 p53四价功能域融合基因,基因全长528bp,可编码176个氨基酸,与已发表的抗人γ-Sm VH单域抗体、人IgG3上游铰链区和人p53四价功能域基因cDNA序列一致.计算机软件分析结果显示,融合基因表达产物可自动装配成四聚体抗体,并具有四条长的、柔性好的多肽,可确保每个抗体空间构象的独立性.结论构建成功四价抗人γ-Sm VH单域抗体,为进一步临床应用奠定基础.