用体外致敏联合EB病毒转化技术构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库

摘要

目的 构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库.方法 体外致敏并用EB病毒(EBV)转化肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC).RT-PCR扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,将抗体基因分别与载体pComb3连接后,电转化大肠杆菌XLI-Blue,构建噬菌体呈现型Fab抗体库.结果 经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生;经PCR扩增出13条轻链基因片段(κ、λ)和28条重链Fd基因片段(γ);电转化构建的噬菌体抗体库库容为1.7×107puf/mL;Fab基因的重组率约为100%.结论 用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,成功构建了全人源抗肝癌Fab组合抗体文库.