甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析

摘要

目的 评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析.方法 接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒.取病毒纯化产物以0.03 mg/只和0.005 mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度.结果 成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2 mg/mL,血凝滴度高达1×49.电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状.同时,有大量空心病毒颗粒存在.H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒.纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体.结论 蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性.因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持.