miR146通过靶向Notch1促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化

摘要

目的 探讨miR146在骨髓间充质干细胞(BMSC)向髓核样细胞分化中的作用及其机制.方法 从SD大鼠中分离培养BMSC,传至第3代用于本实验.以TGFβ1(转化生长因子-β1)诱导BMSC向髓核样细胞分化为模型.检测TGFβ1诱导BMSC后蛋白多糖(ACAN)、Ⅱ型胶原蛋白(COLⅡ)和SOX 9的蛋白及mRNA表达水平;RT-PCR检测miR146的表达水平.随后通过上调或下调miR146水平,检测ACAN、COLⅡ和SOX 9的蛋白及mRNA表达水平;双荧光素酶报告系统验证miR146的靶基因,并上调或下调miR146水平后检测靶基因的蛋白表达水平;过表达靶基因并检测其与miR146 mimic共转染对ACAN、COLⅡ和SOX 9表达的影响.最后,上调或下调靶基因后,检测miR146表达水平的变化.结果 TGFβ1诱导BMSC向髓核样细胞分化后ACAN、COLⅡ、SOX 9和miR146高表达.上调miR146后,ACAN、COLⅡ和SOX 9的表达升高;下调miR146后ACAN、COLⅡ和SOX 9的表达降低.双荧光素酶报告系统证实,Notch1是miR146的靶基因,miR146通过抑制Notch1的表达上调ACAN、COLⅡ和SOX 9的表达水平.上调Notch1后miR146表达下调,下调Notch1后miR146表达上调.结论 miR146通过靶向Notch1促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化,Notch1对miR146亦具有负向调控作用.