-例遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症患者表型诊断及基因分析

摘要

目的：对1例遗传性凝血因子XI（FXI）缺陷症患者及其家系成员进行表型诊断和基因分析,探讨其发病的分子机制.方法：检测先证者及其家系成员（共3代8人）的血浆凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原含量（FIB）、凝血因子Ⅺ促凝活性（FXI：C）及凝血因子Ⅺ抗原含量（FXI：Ag）等指标以明确诊断;聚合酶链式反应（PCR）扩增FXI基因的所有外显子和侧翼序列,扩增产物纯化后直接测序,发现突变位点则反向测序予以证实;用PyMOLViewer1.5.x软件构建野生型和突变型FXI蛋白模型,比对分析寻找突变前后空间构象及分子间作用力的变化.结果：先证者和其弟弟APTT、FXI：C、FXI：Ag均明显异常,分别为78.4s、2.0%、6.8%和62.1s、4.5%、10.0%;其家系成员的FXI：C和FXI：Ag均发现有不同程度下降.基因分析发现先证者和其弟弟FXI基因第6号外显子的g.15410G〉A杂合无义突变导致Trp228stop及第12号外显子的g.25471C〉G杂合错义突变导致Cys482Trp;其父亲、姐姐、女儿、外甥女均为Trp228stop的杂合子,而母亲、侄子则为Cys482Trp的杂合子.模型分析显示Cys482Trp突变并未破坏氨基酸间的天然氢键联系,但使该位点氨基酸与267位氨基酸的空间位阻变大,从而使蛋白的结构发生变化.结论：该遗传性FXI缺陷症患者FXI基因的Trp228stop无义突变和Cys482Trp错义突变与血浆FXI：C及抗原水平降低有关.