缺氧条件下乙酰肝素酶抑制剂PI-88对人视网膜血管内皮细胞自噬的影响

摘要

【目的】探讨乙酰肝素酶(Hpa)竞争性抑制剂PI-88在缺氧条件下对人视网膜血管内皮细胞(HREC)自噬水平的影响。【方法】以HREC为研究对象,设置3组:正常组,缺氧组(CoCl2处理的缺氧组)和实验组(CoCl2+PI-88组)。观察免疫荧光染色检测自噬体特异性标记物LC3蛋白的表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ的表达;通过GFP-LC3腺病毒转染HREC,直接观察活细胞中由GFP-LC3标记的自噬水平。【结果】缺氧状态下,HREC内自噬标记蛋白LC3表达水平上调,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(灰度值,与正常组比较,4.69±0.54比2.14±0.33,P=0.001<0.05),表明LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化明显增加。Hpa抑制剂PI-88可以抑制HREC的LC3表达,使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降(灰度值,与缺氧组比较,3.51±0.20比4.69±0.54,P=0.027<0.05),表明LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化水平下降,且活细胞内自噬体的形成减少。【结论】在缺氧状态下,抑制乙酰肝素酶可下调HREC中的自噬水平。