LncRNAXist通过调控SDF-1/CXCR4轴促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖与迁移

摘要

[目的]探讨lncRNAXist在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和迁移中的作用及其可能机制。[方法]取3周龄的雌性SD大鼠的股骨和胫骨,分离BMSC细胞,体外培养并鉴定。设计并筛选对lncRNAXist沉默效率高的siRNA;利用Lipo2000分别将si-Xist和si-NC转染入实验组(si-Xist组)和对照组(si-NC组)BMSC中。CCK-8实验检测各组BMSC增殖能力。划痕及Transwell迁移实验检测各组BMSC横向和纵向迁移能力。qPCR验证lncRNAXist的沉默效率及检测各组BMSC中SDF-1和CXCR4mRNA水平的相对表达量;westernblot检测各组BMSC中CXCR4蛋白水平的相对表达量。[结果]B MSC第3代细胞呈梭状、漩涡状生长,流式细胞术示CD11b(-)、CD34(-)、CD45(-)、CD44(+)、CD90(+)、CD105(+)。使用siRNA干扰BMSC中lncRNAXist的表达,三条siRNA沉默效率分别为67.92%、68.72%、98.32%。CCK-8实验证明,12h时两组间OD450差异无统计学意义(P>0.05),而在24h和48h时,si-Xist组OD450均低于si-NC组(P0.05);Westernblot实验证实,在蛋白水平,si-Xist组CXCR4相对表达量低于si-NC组(P<0.05)。[结论]L ncRNAXist通过调控CXCR4的表达,提高大鼠BMSC的增殖、迁移能力。