c-myb反义RNA重组载体构建及其包装细胞株的建立

摘要

【目的】构建反义c myb重组逆转录病毒载体并建立其包装细胞株。【方法】采用RT PCR方法 ,获取目的基因 ,通过TA克隆方法克隆入 pUC19,再反向亚克隆入逆转录病毒载体 pDOR中。采用DOTAP法将重组逆转录病毒载体转入包装细胞 ,以NIH3T3细胞为靶细胞测定产病毒滴度。【结果】序列测定结果与GenBank中序列一致。c myb基因片段已定向克隆入 pDOR。细胞转染表明 ,已形成稳定的包装细胞株PA317/pDOR myb ,产病毒滴度达 5 2× 10 4 ～ 9 5× 10 4 CFU/mL。【结论】成功构建了含有反义c myb的重组逆转录病毒质粒 。