小鼠DOC-1R反义重组载体的构建及表达的研究

摘要

背景与目的:DOC-1R(deletedinoralcancer-1related)基因是一个候选的抑癌基因,它与CDK2特异性结合后,抑制CDK2与cyclin形成复合物,进而对细胞周期进行调控。本研究拟构建DOC-1R反义重组质粒,并研究该基因表达受到抑制后对正常细胞增殖产生的影响。方法:小鼠DOC-1R基因筛选后构建pcDNA3-DOC-1R反义重组质粒,经细胞转染,通过细胞增殖能力测定、软琼脂培养观察DOC-1R对细胞生长状态的影响。结果:小鼠DOC-1R基因转染的NIH3T3细胞较空载体转染的细胞生长速度有较明显的差异。正义重组体pcDNA3-DOC-1R+可明显抑制细胞增殖,而反义重组体pcDNA3-DOC-1R-则促进细胞的增殖。在软琼脂培养中,正义重组体在软琼脂培养基中成集落能力下降,一方面克隆形成率下降,另一方面形成的集落也普遍较小;而反义重组体明显增加了成集落能力,克隆形成率也较正义重组体有明显的增加。结论:小鼠DOC-1R基因可明显抑制细胞的生长速度和成集落能力,这一作用有助于进行正常细胞生长、增殖规律和肿瘤治疗、预防方面的研究。