靶向卵巢癌细胞的miR-16/多肽纳米递释系统的制备及其功能验证

摘要

目的 研制增强顺铂敏感性的miR-16/多肽纳米递释系统,实现miRNA的卵巢癌靶向给药并验证其功能.方法 合成R9-SS-R9及cRGD-R9-SS-R9多肽,并与miR-16 mimic分子自组装形成纳米递释系统.利用琼脂糖凝胶电泳技术、粒径电位仪及透射电镜,测定纳米粒的稳定性、粒径、电位及形态等表征结果.利用CCK-8检测多肽对细胞的毒性.利用茎环qRT-PCR技术、活细胞成像技术验证纳米粒的摄取效率及细胞内分布.利用流式细胞术及Western blot技术,验证纳米粒增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的作用及其机制.结果 成功制备R9-SS-R9/miR-16、cRGD-R9-SS-R9/miR-16纳米粒,以5∶1的多肽/miRNA重量配比制得的纳米粒粒径在150 nm以下,分散指数小于0.1,电位约为40 mV,血清稳定性良好.多肽材料无明显的细胞毒性.miR-16/多肽纳米粒可被人卵巢癌细胞充分摄取并分布在细胞质中,且显著提高细胞内miR-16分子的表达水平(P＜0.001),降低细胞中Bcl-2、Chk-1蛋白表达,实现miR-16的促细胞凋亡以及增强细胞对顺铂敏感性的作用.结论 成功制备了miR-16/多肽纳米递释系统,且该系统具有增强卵巢癌顺铂敏感性的功能.