慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力

摘要

目的 筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps 表达后分析对精子运动的影响.方法 构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达.针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286.将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C 1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化.将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响.结果 构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C 1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体.靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显.包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P＜0.05).结论 筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低.