棉花蕾铃离层脱落相关基因的克隆及其表达分析

摘要

【目的】研究激素与棉花蕾铃脱落的关系,为解析离层脱落相关基因的表达、调控及功能鉴定提供基础资料。【方法】以50 mg/L赤霉素（GA3）和250 mg/L乙烯利（CEPA）分别处理的棉花蕾铃离层c DNA为Tester,H2O处理的棉花蕾铃离层c DNA为Driver,利用抑制消减杂交（SSH）技术构建经GA3和乙烯处理后的消减文库,反向Northern blotting筛选出离层差异表达的EST序列,然后进行基因功能注释与功能分类,并分析蕾铃离层差异表达基因的组织表达模式和GA3诱导表达规律。【结果】以GA3处理的离层c DNA为Tester、H2O处理的离层c DNA为Driver,所构建的c DNA文库命名为GA文库;以CEPA处理的离层c DNA为Tester、H2O处理的离层c DNA为Driver,所构建的c DNA文库命名为CE文库。从构建的两个消减文库（GA和CE）中共筛选出29个在离层差异表达的EST序列,通过基因功能注释与功能分类,可将这些EST序列分为翻译相关、代谢相关、信号传导、转录相关、蛋白合成、能量代谢、抗逆相关、基因组序列和未知功能等九大类,其中与翻译相关的EST序列占24.14%,说明经激素处理后棉花蕾铃离层有大量的蛋白合成。从消减文库中挑选10个差异表达基因（EST序列）进行RT-PCR分析,结果发现以GA3处理棉花蕾铃离层后部分相关基因的表达模式会发生变化。【结论】棉花蕾铃离层经激素处理后能激活脱落相关基因的表达,进而影响器官脱落,是其对逆境胁迫反应的结果。