蝴蝶兰MADS-Box基因克隆及植物表达载体的构建

摘要

【目的】克隆蝴蝶兰MADS-Box基因并构建其正义和反义植物表达载体，为其功能研究奠定基础。【方法】以蝴蝶兰杂交品种（Phalaenopsis hybrid cv.Jiuhbao Red Rose）为试验材料，采用RT-PCR和RACE技术从花葶中克隆MADS-Box基因，并构建正义和反义植物表达载体。【结果】克隆获得一个蝴蝶兰MADS-Box基因，命名为DtpsMADS1（GeneBank登录号JQ065097）。该基因cDNA全长960 bp，包含37 bp的5＇非编码区、185 bp的3＇非编码区和一个738 bp的编码区；该基因编码245个氨基酸。生物信息学分析结果表明，该基因编码的蛋白质为碱性亲水性蛋白，具有62.45%的α-螺旋，8.16%的延伸链和29.39%的不规则折叠。序列比对和系统进化分析结果表明，DtpsMADS1与蝴蝶兰ORAP13的亲缘关系最近，同源性达99.0%，与石斛和蕙兰的同源性分别为83.0%和82.0%，属于MADS家族A类亚家族。将DtpsMADS1基因连接到植物表达载体pBI121上，构建获得正、反义植物表达载体pBI121-DtpsMADS1-S和pBI121-DtpsMADS1-A。【结论】成功克隆的蝴蝶兰DtpsMADS1基因属于MADS家族A类亚家族，具有明显的保守性和特异性，可为蝴蝶兰DtpsMADS1基因功能的鉴定及蝴蝶兰的遗传改良奠定基础。