phbB、phbC基因克隆、序列分析及植物表达载体的构建

摘要

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从真养产碱杆菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ Ｈ１６ 染色体ＤＮＡ 中扩增并克隆了调控聚－β－羟基丁酸（ｐｏｌｙ－β－ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ， ＰＨＢ）生物合成的两个关键酶基因：依赖ＮＡＤＰＨ 的乙酰乙酰ＣｏＡ 还原酶基因（ｐｈｂＢ）和ＰＨＢ合成酶基因（ｐｈｂＣ）。限制性内切酶图谱和核苷酸序列分析证实了克隆结果，并表明所克隆的基因与国外报道的有很高的同源性。经过基因拼接，构建了块茎特异性表达的高等植物表达载体ｐＰＳＡＧＢ（嵌合ｐｈｂＢ）、ｐＢＩＢＧＣ（嵌合ｐｈｂＣ）和ｐＰＳＡＧＣＢ（嵌合ｐｈｂＢ和ｐｈｂＣ双基因）