抗果蝇Trio蛋白抗体的制备及鉴定

摘要

目的:制备兔抗果蝇Trio蛋白的抗体.方法:以RT-PCR扩增Trio的1 173 bp的基因片段并克隆入pET28a(+) 和pGEX-4T-1 (His)6C表达载体中,表达并纯化Trio-His、Trio-GST融合蛋白.用纯化的Trio-His融合蛋白免疫家兔产生抗Trio的抗体,用Trio-GST亲和层析法进行纯化并采用Western blot法检测抗体生物学活性.结果:表达的Trio-His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Trio-His融合蛋白,以纯化的Trio-His免疫家兔制备的兔抗Trio的抗体,经Western blot分析显示该抗体可与果蝇S2细胞Trio特异性结合.结论:获得具有良好特异性的兔抗Trio抗体,为进一步研究Trio的功能奠定了基础.