抗果蝇Dnop5蛋白抗体的制备及其特性鉴定

摘要

目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定. 方法:以RT-PCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5-His融合蛋白.用纯化的Dnop5-His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化.采用Western blot法和免疫组化染色法鉴定该抗体的特异性及生物学活性. 结果:表达的Dnop5-His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Dnop5-His融合蛋白,以纯化的Dnop5-His免疫家兔制备的兔抗Dnop5的抗体,经Western blot分析显示:该抗体可与果蝇的胚胎、幼虫、蛹及成虫组织中表达的Dnop5特异性结合. 结论:获得具有良好特异性的兔抗dnop5抗体,为进一步研究Dnop5的功能奠定了基础。