对培美曲塞耐药胰腺癌Patu8988细胞株克隆、侵袭能力及相关耐药基因的研究

摘要

目的:探讨对培美曲塞耐药的胰腺癌Patu8988细胞株相对于亲本株在细胞克隆、侵袭能力及多药耐药相关蛋白1(MDR1)、ABC多药转运蛋白G家族成员2(ABCG2)、ABC多药转运蛋白C家族成员3(ABCC3)耐药基因的变化.方法:采用双层软琼脂克隆实验分别在无药及加入500 μmol·L-1培美曲塞的环境下测定胰腺癌Patu8988耐药株及亲本株克隆生成能力的改变;采用Transwell侵袭小室检测两种条件下胰腺癌Patu8988侵袭能力的差异;采用RT-PCR法检测胰腺癌Patu8988细胞MDR1、ABCG2、ABCC3的mRNA表达水平,Wersten blot检测ABCG2和ABCC3的蛋白表达水平,免疫荧光及激光共聚焦检测ABCG2的表达及分布.结果:在无药及加入500 μmol·L-1培美曲塞的环境下,对培美曲塞耐药胰腺癌Patu8988细胞株的增殖克隆能力均与其亲本株有差异(P<0.05),而两种培养条件下胰腺癌Patu8988细胞株的侵袭能力变化差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR检测显示,在耐药株中ABCG2、ABCC3 mRNA表达分别是其亲本株的2.5倍和1.6倍左右,而MDR1 mRNA表达仅提高到1.2倍;Werstenblot结果显示蛋白表达为其亲本株的2.4倍和1.5倍.免疫荧光检测结果显示,耐药株中ABCG2的荧光强度较强,而其亲本株细胞较弱.激光共聚焦显示,耐药株中ABCG2表达主要分布于细胞膜,细胞质内也有少量分布.结论:相对于亲本株,对培美曲塞耐药的胰腺癌Patu8988细胞株克隆能力加强,而侵袭能力无明显改变.多药耐药基因表达均有不同程度的提高,以ABCG2基因表达提高尤为明显,而且其在耐药株中主要分布在细胞膜,细胞质内也有分布.