MMP-9单克隆抗体超微超顺磁性氧化铁粒子的合成并行ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化7.0TMR成像的研究

摘要

目的:通过化学合成方法制作基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)单克隆抗体超微超顺磁性氧化铁(ultrasmall superparamagnetic iron oxide,USPIO)粒子MR分子探针,并探讨其作为MR特异性分子探针示踪剂使动脉粥样硬化成像的可行性.方法:采用EDC (1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride)化学连接剂将MMP-9单克隆抗体与DMSA [meso-2,3-dimercaptosuccinic acid,(HOOCCH(SH)-CH (SH)-COOH) ]修饰的USPIO相结合,形成具有免疫学活性的MR分子探针.通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其免疫活性及生物稳定性.采用高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠结合机械损伤的方法,建立小鼠左侧颈动脉粥样硬化模型.将MR磁性粒子探针(Ab-MMP-9-USPIO)经小鼠尾静脉注射(45 mgFe·kg-1),分别于0、4、6、24、48 h对小鼠颈部行7.0 T MR扫描检查.结果:向0.05 mg的USPIO溶液中加入不同质量的单克隆抗体,ELISA试验所得的生成物MMP-9单克隆抗体超微超顺磁性纳米颗粒(Ab-MMP-9-USPIO)吸光度值随抗体含量增加而增大,与阴性对照USPIO组(未加单克隆抗体)相比较差异有统计学意义(P<0.05),分别间隔3 d及100 d后再次测量,100 μg及200 μg单抗组吸光度值降低(P<0.05).经小鼠尾静脉注射磁性粒子探针后6 h,损伤侧颈动脉斑块管壁信号于T2WI像上降低最显著,管腔呈"假性扩大样"改变.结论:EDC化学方法可制备出单克隆抗体USPIO粒子,同时仍具有抗体的免疫学活性及生物稳定性.该合成物可以作为MR分子探针在体显像小鼠颈动脉粥样硬化斑块,为动脉粥样硬化斑块的分子成像提供了实验依据.