DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21的构建及其预防HSK的动物实验初步研究

摘要

目的:构建DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21,探讨其是否能诱导动物免疫应答及抵抗眼角膜单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的感染.方法:提取HSV-1基因组DNA,PCR扩增获得gC基因.以pRSC-gD-IL-21质粒为模板(本实验室2011年构建),构建重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21,用纳米材料壳聚糖(chitosan)包裹,采用黏膜接种的方式分别以pRSC-gD.gC-IL-21+chitosan、pRSC-gD-IL-21+chitosan、pRSC+ chitosan及chitosan 免疫小鼠3次,间隔2周,末次免疫2周后检测各项免疫学指标,同时评价小鼠对病毒攻击角膜的免疫保护作用.结果:经测序、酶切及Western blot鉴定,重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,chitosan包裹率高.与对照鼠相比,该疫苗在鼠体内产生了更强的特异性中和抗体、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及自然杀伤细胞(NK)杀伤活性增强、泪液中特异性sIgA水平增高,同时使小鼠产生了较强的针对眼角膜HSV-1感染的免疫保护作用.结论:DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,能诱导小鼠产生较强的免疫应答及针对HSV-1眼部感染的免疫保护作用,能够预防单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)的发生、发展.