植物乳杆菌LAI的酵母表面展示

摘要

为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌lp15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和α-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺失型培养基上筛选出转化子.氨基酸序列比对分析表明,LAI与肌球蛋白交叉反应抗原蛋白家族同源性极高,N端含有一个半保守的黄素腺嘌呤二核苷酸结合基序.对酵母工程菌株的研究表明,LAI成功地在酵母细胞表面展示,酶活在诱导培养48 h时达到最大,为40.5 U/mL.气相色谱检测发现,酵母工程菌株能够合成单一的c9t,11-共轭亚油酸异构体.