丹毒丝菌SpaA基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要

[目的]以毕赤酵母Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌Erysipelothrix rhusiopathiae SpaA基因氨基端的免疫保护区蛋白.[方法]以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板,根据NCBI中已发表的Spa基因cDNA序列设计1对引物,通过PCR扩增得到SpaA-N,并将其连接到表达载体pPICZαC上,得到重组表达质粒pPICZαC-SpaA-N;用Sac I酶将重组表达质粒pPICZαC-SpaA-N线性化后电转化入毕赤酵母X-33,经含博来霉素ZencinTM抗性的YP-DS平板筛选和PCR鉴定的阳性转化子,用含不同浓度博来霉素抗性的YPDS平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养,分别于诱导48、72、96 h后离心收集上清液,立即做SDS-PAGE,并进行SDS-PAGE及Western-blot试验.[结果和结论]成功克隆并表达了SpaA-N基因,构建了重组表达质粒pPICZαC-SpaA-N,并以毕赤酵母X-33为宿主成功表达了猪丹毒丝菌SpaA基因氨基端的免疫保护区蛋白.丹毒丝菌SpaA-N作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达.