红斑丹毒丝菌SpaA蛋白保护区域的免疫学检测

摘要

为了确定菌体表面保护性抗原A(SpaA)的免疫保护区域,通过PCR从红斑丹毒丝菌C43065株基因组DNA中分别扩增出编码成熟SpaA及其N端342个氨基酸序列(SpaA-N)和C端160个氨基酸序列(SpaA-C)的基因片段,将它们分别克隆到表达载体pET32a上,转化入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导,亲和层析法纯化重组蛋白,并检测它们对小鼠的保护作用.SDS-PAGE结果显示重组SpaA、SpaA-N和SpaA-C以可溶性形式表达在大肠埃希菌BL21细胞质中并具有良好的免疫原性.保护试验结果表明重组SpaA、SpaA-N和NaOH提取抗原微生物学杂志 2013年10月第33卷第5期 JOURNAL OF MICROBIOLOGY Oct.2013 Vol.33 No.5 微生物学杂志 33卷完全保护小鼠受强毒株C43065的致死性感染,但重组SpaA-C没有保护作用.结果表明SpaA-N可以作为预防猪丹毒的亚单位疫苗.