组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定

摘要

通过改变终止密码子位点，在一个耐热木聚糖酶突变株DSB的C末端添加了6聚组氨酸标签（ His-tag ），并完成了表达和酶特性鉴定．通过PCR将嗜热真菌DSM 10635来源的木聚糖酶突变体基因dsb的终止密码子序列定点突变为谷氨酸密码子序列，连接到表达载体pET-22b（＋），转化Escherichia coli．BL21（DE3），诱导表达的耐热木聚糖酶DSB在C端含有6×His-tag．表达产物经硫酸铵分级沉淀和Ni Sepharose层析纯化，获得了电泳纯重组酶DSB．结果表明：添加组氨酸标签的酶与原始酶相比，酶学特性无变化．SDS-PAGE电泳结果显示该酶分子量约为23 kDa，重组酶最适pH为6．5，最适温度为75℃，在pH 5～10具有良好的稳定性，在pH 6．5，70℃条件下处理30 min相对酶活力仍保留80％以上．