含组氨酸蛋白标签的蓝舌病假病毒物质构建及定量分析

摘要

基于蓝舌病(bluetongue,BT)的危害及RNA阳性质控品研制的重要性,试验将pTrcHis-MS2质粒借助点突变技术在噬菌体外壳蛋白15和16氨基酸之间插入组氨酸(His)蛋白标签,构建了pTrcMS载体.将pMD19-T-BTV质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切,然后连接构建pTrcMS-BTV重组质粒.将pTrcMS-BTV重组菌进行原核表达,产物借助偶联His蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的蓝舌病假病毒颗粒,进行特性鉴定并定量.结果显示,研制的pTrcMSBTV物质经PCR方法评价纯度高,无基因DNA污染;透射电镜观察形态为不规则的直径约为26nm的多边形;RT-PCR方法检测稳定性表明该物质耐RNase A,易保存;应用荧光RT-PCR检测表明该物质溶液最低检测限可达到2.5×102拷贝/mL.蓝舌病假病毒物质将为蓝舌病分子生物学检测提供阳性质控物质.