扩增内标在副溶血弧菌多重PCR检测方法中的应用

摘要

建立扩增内标存在下同时检测副溶血弧菌tlh基因和trh基因的多重PCR方法.以细菌16SrDNA片段为扩增内标对照(internal amplification control,IAC),副溶血弧菌不耐热溶血毒素(thermolabile hemolysin,TLH)基因tlh和相对耐热直接溶血毒素(thermostable related hemolysin,TRH)基因trh为检测基因,设计引物,并优化多重PCR体系.特异性及灵敏度试验结果表明:该多重PCR体系检测致病性副溶血弧菌表现出极好的特异性.纯培养条件下,扩增内标存在时tlh基因和致病基因trh的检测灵敏度分别为1.3×102 cfu·mL-1和1.3×103cfu·mL-1;人工污染牡蛎样品,不经富集培养,扩增内标存在时tlh基因和致病基因trh的检测灵敏度分别为2.6×103 cfu·mL-1和2.6×104 cfu·mL-1:经过6h的富集培养,tlh基因和trh基因的检测限均能达到2.6×102 cfu·mL-1.该检测体系特异性强、灵敏度高,并且扩增内标的存在可排除PCR检测致病性副溶血弧菌可能导致的假阴性结果,可提高检测的速度和精准度.