大肠杆菌二硫键异构酶DsbC的表达、纯化及活性分析

摘要

将大肠杆菌二硫键异构酶DsbC基因克隆到表达载体pRSETc中,并在宿主菌E.coli BL21(DE3)中通过IPTG诱导进行可溶性表达.用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了His6-DsbC,通过Superdex 75凝胶过滤层析获得纯His6-DsbC蛋白.Western blot和凝胶过滤层析分析表明,该蛋白以二聚体的形式存在.通过RP-HPLC分析,表达的His6-DsbC以氧化型和还原型存在,并且该两种形态在一定的氧化还原体系中能够相互转化.HRP重折叠实验说明,重组DsbC能够提高HRP的复性率.