下调MMSA-8基因对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖和侵袭能力的影响

摘要

目的 探讨慢病毒介导的shRNA干扰下调MMSA-8基因表达对骨髓瘤细胞RPMI8226体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨MMSA-8表达水平变化与P53及MDM2表达水平变化的关系.方法 用慢病毒介导的shRNA稳定转染骨髓瘤RPMI8226细胞,下调MMSA-8基因表达.设立五个实验组,RNAi组MMSA-8-shRNA1、MMSA-8-shRNA2、MMSA-8-shR-NA3(RNAi1、RNAi2、RNAi3组),空载体组(阴参组)和细胞未做任何处理组(空白组)用Q-PCR和Western blot方法检测RNA干扰后各组间MMSA-8、P53、MDM2的mRNA水平和蛋白水平.通过MTT增殖实验,流式细胞术检测各组间RPMI8226细胞细胞周期的差异.通过Transwell小室迁移和侵袭实验观察各组RPMI8226细胞侵袭数的差异.结果 RNA干扰后72 h,Q-PCR和Western blot检测表明,RNAi组(RNAi1、RNAi2、RNAi3组)MMSA-8的mRNA和蛋白水平较空白组和阴参组显著下降,其中RNAi3组下降最为明显(P<0.05);MTT实验显示RNAi3组的RPMI8226细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示RNAi3组停留在sub-G 1期的比例明显增大(P<0.05);Transwell实验显示RNAi3组的侵袭的细胞数较空白组和阴参组显著减少(P<0.01).此外,RNAi3组P53表达水平较空白组和阴参组高,MDM2表达水平较空白组和阴参组高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢病毒介导的shRNA干扰能显著下调MMSA-8的表达水平,能够显著抑制骨髓瘤细胞RPMI8226的体外增殖、迁移和侵袭能力.MMSA-8对骨髓瘤细胞增殖、侵袭能力的影响可能是通过调节P53-MDM2环路实现的.