重组人碱性成纤维细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响

摘要

目的 探讨不同浓度的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)对体外HaCaT细胞增殖的影响,并以此为临床准确定量应用rh-bFGF修复创面愈合提供理论依据.方法 利用HaCaT细胞体外培养,用rh-bFGF干预细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的rh-bFGF对HaCaT细胞增殖的影响,选择最适浓度rh-bFGF干预的HaCaT细胞,用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况.结果 ①HaCaT细胞传代后24 h基本贴壁,未贴壁的细胞在换培养液过程中被清除,约4-5 d长满瓶底的80%,继续传代.该细胞分布较均匀的,呈长条形或梭形.②rh-bFGF实验组分为6组,其浓度分别为10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml,300 ng/ml,500 ng/ml时,吸光度值分别为0.362±0.011,0.452±0.017,0.510±0.012,0.318±0.019,0.216±0.022,0.140±0.057;并设立空白对照组,其吸光度值为0.137±0.012.③培养48 h时流式细胞仪对rh-bFGF最适浓度(100 ng/ml)下细胞倍体含量的测定:合成前期=43.46%,为二倍体;分裂前期=41.42%,为四倍体;未见非整倍体.提示细胞分化良好,无异常分化表现.结论 rh-bFGF在1-100 ng/ml时对体外培养的HaCaT细胞有明显的促增生作用,在100 ng/ml时达到了最佳效果,随着rh-bFGF的浓度增加,这种促增殖作用有所下降.临床使用中应注意有效浓度的重要性,否则过度的使用该因子会产生负面的效果,影响临床效果.