HaCaT细胞

摘要： 目的:探讨7-羟基异黄酮对HaCaT细胞的增殖活性和中波紫外线(UVB)诱导光损伤的影响及作用机制。方法:通过细胞计数法检测不同浓度7-羟基异黄酮对HaCaT细胞增殖活性的影响;用200μmol/L 7-羟基异黄酮预处理HaCaT细胞后给予30 m J/cm;的UVB照射,荧光法检测活性氧(ROS)生成量,用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白聚ADP-核糖聚合酶1(PARP1)和半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)的表达。结果:200μmol/L的7-羟基异黄酮对HaCaT细胞增殖活性作用最明显,可降低UVB诱导的ROS生成量,抑制PARP1和Caspase-8的表达。结论:7-羟基异黄酮能减轻UVB所致的光损伤,对细胞具有光保护作用,可预防UVB造成的皮肤损伤。

摘要： 目的评价四氢姜黄素(tetrahydrocurcuminoids,THC)的抗氧化作用及对黑色素生成的影响,并探索其抑制黑色素生成的作用机制。方法抗氧化作用评价采用人类永生化表皮细胞(HaCaT细胞)模型,ELISA法检测HaCaT细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乳酸脱氢酶(LDH)活性水平;DPPH法、T-AOC法检测THC总抗氧化活性。抑制黑色素生成试验采用小鼠黑色素瘤细胞B16F10模型,CCK8法测定THC对小鼠B16F10细胞增殖活性的影响,NaOH裂解法及多巴氧化法分别测定B16F10细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性;划痕实验探究THC对B16F10细胞迁移的影响,Western blot测定黑色素生成相关蛋白小眼转录因子(MITF)的表达。结果THC可增加HaCaT细胞的SOD、GSH-PX水平,降低LDH含量,同时可增加对DPPH自由基的清除率和对Fe^(3+)的还原能力;THC可抑制小鼠B16F10细胞增殖和迁移,降低B16F10细胞内黑色素含量,降低酪氨酸酶活性,抑制MITF的表达。结论四氢姜黄素具有抗氧化作用,可抑制黑色素生成,其作用机制与抑制MITF的表达有关。

摘要： 目的探讨氧化苦参碱调控叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)表达对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响。方法细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测不同浓度TNF-α对HaCaT细胞增殖活性的影响,筛选TNF-α诱导浓度和时间。将诱导后的HaCaT细胞分为模型组(25μg/L TNF-α)、氧化苦参碱组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,未转染)、氧化苦参碱+LV-NC-GFP组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染空载体)、氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组(25μg/L TNF-α和40 mg/mL氧化苦参碱,转染FOXO1过表达载体),另取正常培养的HaCaT细胞为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中FOXO1表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中炎性因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中AKT、TLR-4和FOXO1蛋白表达水平。结果本研究采用25μg/L TNF-α处理24 h诱导HaCaT细胞。与对照组相比,模型组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,氧化苦参碱组和氧化苦参碱+LV-NC-GFP组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与氧化苦参碱+LV-NC-GFP组相比,氧化苦参碱+LV-CA-FOXO1组HaCaT细胞FOXO1 mRNA表达水平、细胞增殖活性、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及TLR-4、FOXO1蛋白表达和AKT磷酸化水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过靶向抑制FOXO1表达降低炎性因子分泌,并可促进HaCaT细胞凋亡,抑制细胞增殖。

摘要： 目的 探讨白芍总苷对HaCaT细胞增殖、侵袭、迁移能力及外泌体释放的影响与可能机制。方法 采用50、100、200μg/L白芍总苷处理HaCaT细胞(分别设为低剂量组、中剂量组、高剂量组),同时设对照组(加入等量完全培养液)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组不同时点的细胞增殖能力;采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力、侵袭能力;培养24 h,高速离心提取外泌体,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、CD63及CD81的蛋白表达量,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K的mRNA表达量。结果 培养0、24 h时,4组细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,细胞增殖抑制率由高至低排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。迁移细胞、侵袭细胞数量由低至高排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1、CD63、CD81、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白表达量和CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K mRNA表达水平由低至高排列均依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白芍总苷能够抑制HaCaT细胞外泌体分泌,并抑制HaCaT细胞增殖、侵袭及迁移能力,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。

摘要： 对灵芝蜂蜜面膜进行活性和安全性评价研究,为传统中药面部外用制剂的应用提供实验数据支持。将灵芝蜂蜜面膜用水、50%乙醇以及90%乙醇进行提取,制备不同溶剂提取液。将不同溶剂制备的灵芝蜂蜜面膜提取液进行DPPH自由基清除实验,研究不同溶剂提取液的抗氧化作用;将灵芝蜂蜜面膜水、90%乙醇提取液作用于人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞),用MTT法筛选出安全给药浓度;采用RT-qPCR法检测灵芝蜂蜜面膜对HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA表达水平的影响;将灵芝蜂蜜面膜涂抹于昆明小鼠皮肤表面,进行动物急性皮肤毒性实验,评价其安全性。结果表明,不同溶剂制备的灵芝蜂蜜面膜提取液均能清除活性氧自由基,其中水提取液IC_(50)为14.123 mg/mL、50%乙醇提取液IC_(50)为22.651 mg/mL、90%乙醇提取液IC_(50)为22.140 mg/mL;灵芝蜂蜜面膜水提取液和90%乙醇提取液低剂量时可以增强HaCaT细胞的细胞活力,具有细胞保护作用。与模型组相比,处理组HaCaT细胞中MMP-1和MMP-9的mRNA表达水平明显降低。动物实验结果表明:灵芝蜂蜜面膜对昆明小鼠皮肤无毒性。灵芝蜂蜜面膜具有良好的抗氧化作用,可以有效抑制细胞外基质的降解、延缓细胞的衰老,对皮肤无毒性,具有高度安全性。

摘要： 目的观察人参皂苷Rg_(1)对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化损伤保护作用,并探讨其机制。方法体外培养HaCaT细胞,H_(2)O_(2)诱导细胞建立氧化应激损伤模型,分为空白组、H_(2)O_(2)损伤组、人参皂苷Rg_(1)保护组。细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,Hochest染色法检测细胞凋亡情况,活性氧检测试剂盒测定细胞活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中caspase-3、caspase-6、caspase-8、GAPDH蛋白表达。结果H_(2)O_(2)诱导HaCaT细胞半数抑制浓度为100μg·mL^(-1);与H_(2)O_(2)损伤组比较,5、10和15 mg·L^(-1)人参皂苷Rg_(1)预处理后,HaCaT细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞核皱缩损伤状态明显改善,细胞凋亡数量显著减少。同时,人参皂苷Rg_(1)预处理可显著降低HaCaT细胞活性氧水平,下调凋亡相关标志蛋白-活化型caspase-3、caspase-6、caspase-8蛋白表达水平。结论人参皂苷Rg_(1)对H_(2)O_(2)诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制凋亡相关。

摘要： 目的:探讨川芎嗪调控NF-κB信号通路对银屑病HaCaT细胞模型趋化因子和炎症因子表达的影响。方法:HaCaT细胞分为Control、Model(10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-L(0.1 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M(0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-H(0.4 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)、TMP-M+PMA组(1μmol/L的NF-κB信号激活剂PMA、0.2 mg/ml的川芎嗪、10 ng/ml的TNF-α和IFN-γ处理)。qRT-PCR检测Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达,ELISA法检测IL-6、IL-4、IL-13含量,Western blot检测p65、IκBα蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平升高(1.00±0.09 vs 3.69±0.25,1.00±0.10 vs4.51±0.28,1.00±0.11 vs 2.96±0.21,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(96.32±8.87)pg/ml vs(275.14±26.31)pg/ml,(23.61±1.47)pg/ml vs(108.62±11.96)pg/ml,(5.58±0.42)pg/ml vs(26.35±2.47)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.23±0.02 vs 0.86±0.08,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.96±0.09 vs 0.25±0.04,P<0.05)。与Model组相比,TMP-L、TMP-M、TMP-H组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA表达水平依次降低(3.69±0.25 vs 2.75±0.14、2.23±0.16、1.40±0.11,4.51±0.28 vs 3.27±0.36、2.23±0.17、1.80±0.12,2.96±0.21 vs 2.03±0.14、1.62±0.12、1.14±0.11,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13减少[(275.14±26.31) pg/ml vs (204.15±13.62) pg/ml、(162.01±14.81) pg/ml、(117.62±10.30) pg/ml,(108.62±11.96) pg/ml vs(80.43±7.79)pg/ml、(53.24±4.11)pg/ml、(31.20±2.26)pg/ml,(26.35±2.47)pg/ml vs(14.20±1.22)pg/ml、(10.66±1.04)pg/ml、(6.42±0.50)pg/ml,P<0.05],细胞中p65蛋白表达水平降低(0.86±0.08 vs 0.56±0.05、0.45±0.04、0.30±0.03,P<0.05),IκBα蛋白表达水平升高(0.25±0.04 vs 0.52±0.06、0.63±0.06、0.79±0.07,P<0.05)。与TMP-M组相比,TMP-M+PMA组HaCaT细胞模型中Eotaxin、RANTES、TARC mRNA水平升高(1.00±0.08 vs 1.86±0.12,1.00±0.10 vs 2.64±0.23,1.00±0.09 vs 1.56±0.13,P<0.05),细胞分泌的IL-6、IL-4、IL-13增多[(163.50±12.84)pg/ml vs(200.61±13.60)pg/ml,(52.87±5.39)pg/ml vs(86.48±6.92)pg/ml,(9.76±0.75)pg/ml vs(16.42±1.37)pg/ml,P<0.05],p65蛋白表达水平升高(0.45±0.06 vs 0.98±0.12,P<0.05),IκBα蛋白表达水平降低(0.60±0.07 vs 0.26±0.03,P<0.05)。结论:川芎嗪通过抑制NF-κB信号通路降低银屑病HaCaT细胞模型趋化因子表达和炎症因子分泌水平。

摘要： 目的:研究金银花口服液在抑制炎症、促进皮肤屏障分化方面的抗特应性皮炎效果。方法:以不同浓度的金银花口服液处理正常HaCaT细胞,四甲基偶氮唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazolium,MTT)法检测药物对细胞存活率的影响;使用10μg/L肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)/干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)处理HaCaT细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)检测金银花口服液对造模后HaCaT细胞中相关炎症因子[趋化因子(Chemoattractant Cytokine Ligand,CCL)17、CCL22、CCL5、白细胞介素(Interleukin,IL)-8、胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)] mRNA的表达。同时使用20μg/L的IL-4处理HaCaT细胞引起的特应性皮炎角质以形成细胞分化障碍模型,用RT-qPCR法检测金银花口服液对造模后HaCaT细胞中相关皮肤结构蛋白、丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)、兜甲蛋白(Loricrin,LOR)mRNA的表达。结果:金银花口服液处理后,HaCaT细胞中相关促炎细胞因子CCL17、CCL22、IL-8、TSLP的mRNA表达水平均明显降低,同时一定程度上恢复了皮肤屏障蛋白FLG、LOR的mRNA表达,结果差异均具有统计学意义,并呈浓度依赖性。结论:金银花口服液可抑制HaCaT特应性皮炎细胞模型相关细胞炎症因子的表达,并促进皮肤相关结构蛋白的形成,达到抗炎并修复皮肤屏障的效果。

摘要： 本文使用紫外线B(UVB)照射人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞),采用CCK-8法及台盼蓝染色检测细胞活力对银耳多糖(TFPS)的抗光老化活性进行研究。结果表明,1~5 mg/mL银耳多糖(TFPS)可提高HaCaT细胞被UVB照射后降低的细胞活力且安全性好,研究为银耳多糖(TFPS)在具有抗光老化活性的功能护肤品或修复皮肤光损伤治疗药物方面的应用提供了实验依据。

摘要： 目的:对赵尚华教授的经验方土槐丹四物汤进行网络药理学分析,并对结果进行体外细胞实验验证,探讨土槐丹四物汤治疗银屑病的相关作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、GeneCards和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库对土槐丹四物汤方的潜在有效成分、作用靶点以及银屑病相关靶点进行筛选,通过Cytoscape软件绘制土槐丹四物汤治疗银屑病的“药物-成分-靶标”网络图,利用STRING数据库进行靶点蛋白相关作用网络构建并对靶点蛋白功能进行富集分析。利用脂多糖(LPS)诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)建立银屑病细胞模型,对核心靶点进行细胞实验验证。结果:通过网络药理学分析,土槐丹四物汤包含29个有效成分,这些有效成分可能与银屑病相关的124个潜在的靶点蛋白存在相互作用;筛选出土槐丹四物汤作用的关键有效成分槲皮素、柚皮素及山奈酚和关键靶点TNF、JUN、AKT1以及MAPK1;富集分析结果显示土槐丹四物汤治疗银屑病靶点主要富集在多个生物学过程,影响包括AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路在内的多个信号通路。细胞实验结果显示,三种有效成分组成的混合药物能显著降低LPS诱导的HaCaT细胞中TNF-α、JNK、AKT1、MAPK1水平,且作用效果呈浓度依赖的趋势。结论:土槐丹四物汤能够通过其含有的槲皮素、柚皮素和山奈酚3种成分抑制HaCaT细胞过度增殖,降低细胞TNF-α、JUN、AKT1、MAPK1水平。

摘要： 目的：研究白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应并初步探讨其机制. 方法：用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率.单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)和二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化.Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化. 结果：经10～80J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随照射剂量的增加逐渐降低(p＜0.05).白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p＜0.01),降低其凋亡率和死亡率(p＜0.05).20J/cm2UVA照射后3～24h,HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ蛋白表达增强(p＜0.01).白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p＜0.01),ROS水平降低(p＜0.01),p-AKT蛋白表达增强(p＜0.01). 结论：白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化、降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡.

摘要： 目的：研究白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应并初步探讨其机制. 方法：用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率.单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)和二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化.Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化. 结果：经10～80J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随照射剂量的增加逐渐降低(p＜0.05).白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p＜0.01),降低其凋亡率和死亡率(p＜0.05).20J/cm2UVA照射后3～24h,HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ蛋白表达增强(p＜0.01).白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p＜0.01),ROS水平降低(p＜0.01),p-AKT蛋白表达增强(p＜0.01). 结论：白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化、降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡.

摘要： 目的：研究白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应并初步探讨其机制. 方法：用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率.单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)和二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化.Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化. 结果：经10～80J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随照射剂量的增加逐渐降低(p＜0.05).白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p＜0.01),降低其凋亡率和死亡率(p＜0.05).20J/cm2UVA照射后3～24h,HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ蛋白表达增强(p＜0.01).白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p＜0.01),ROS水平降低(p＜0.01),p-AKT蛋白表达增强(p＜0.01). 结论：白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化、降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡.

摘要： 目的：研究白藜芦醇对UVA照射HaCaT细胞的防护效应并初步探讨其机制. 方法：用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HaCaT细胞的增殖水平.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HaCaT细胞的凋亡率和死亡率.单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)和二氯荧光黄二乙酸酯(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色分别检测HaCaT细胞内自噬体和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化.Western blot检测HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ、磷酸化AKT(p-AKT)和总AKT蛋白表达变化. 结果：经10～80J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞的增殖水平随照射剂量的增加逐渐降低(p＜0.05).白藜芦醇预处理能显著促进UVA照射后HaCaT细胞增殖(p＜0.01),降低其凋亡率和死亡率(p＜0.05).20J/cm2UVA照射后3～24h,HaCaT细胞内LC3B-Ⅱ蛋白表达增强(p＜0.01).白藜芦醇预处理能使UVA照射后HaCaT细胞内自噬增强(p＜0.01),ROS水平降低(p＜0.01),p-AKT蛋白表达增强(p＜0.01). 结论：白藜芦醇可能通过促进细胞自噬和AKT蛋白磷酸化、降低细胞内ROS水平,拮抗UVA导致的HaCaT细胞增殖抑制、凋亡和死亡.

摘要： 目的:探讨黄芪提取液促HaCaT细胞增殖作用中的可能机制.方法:MTT法观察不同浓度黄芪提取液作用下HaCaT细胞增殖的改变;RT-PCR法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1蛋白质表达;结果:1mg/ml黄芪提取液即可明显促进HaCaT细胞增殖且随浓度增高促增殖作用增强,5mg/ml黄芪提取液对HaCaT细胞增殖作用达到最佳;5mg/ml黄芪提取液作用下,NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达升高.结论:黄芪提取液能够促进HaCaT细胞增殖,而这一作用可能是通过提高NRP-1蛋白表达来实现的.

摘要： 目的:探讨黄芪提取液促HaCaT细胞增殖作用中的可能机制.方法:MTT法观察不同浓度黄芪提取液作用下HaCaT细胞增殖的改变;RT-PCR法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1蛋白质表达;结果:1mg/ml黄芪提取液即可明显促进HaCaT细胞增殖且随浓度增高促增殖作用增强,5mg/ml黄芪提取液对HaCaT细胞增殖作用达到最佳;5mg/ml黄芪提取液作用下,NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达升高.结论:黄芪提取液能够促进HaCaT细胞增殖,而这一作用可能是通过提高NRP-1蛋白表达来实现的.

摘要： 目的:探讨黄芪提取液促HaCaT细胞增殖作用中的可能机制.方法:MTT法观察不同浓度黄芪提取液作用下HaCaT细胞增殖的改变;RT-PCR法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1蛋白质表达;结果:1mg/ml黄芪提取液即可明显促进HaCaT细胞增殖且随浓度增高促增殖作用增强,5mg/ml黄芪提取液对HaCaT细胞增殖作用达到最佳;5mg/ml黄芪提取液作用下,NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达升高.结论:黄芪提取液能够促进HaCaT细胞增殖,而这一作用可能是通过提高NRP-1蛋白表达来实现的.

摘要： 目的:探讨黄芪提取液促HaCaT细胞增殖作用中的可能机制.方法:MTT法观察不同浓度黄芪提取液作用下HaCaT细胞增殖的改变;RT-PCR法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测黄芪提取液作用于HaCaT细胞后NRP-1蛋白质表达;结果:1mg/ml黄芪提取液即可明显促进HaCaT细胞增殖且随浓度增高促增殖作用增强,5mg/ml黄芪提取液对HaCaT细胞增殖作用达到最佳;5mg/ml黄芪提取液作用下,NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达升高.结论:黄芪提取液能够促进HaCaT细胞增殖,而这一作用可能是通过提高NRP-1蛋白表达来实现的.

摘要： 目的:探索龙胆草提取物对EGF刺激后的naCaT细胞增殖和凋亡及p-E6FR表达的影响.方法:取不同浓度龙胆草提取物作用于EGF刺激24h后的HaCat细胞,用MTT法检测细胞增殖率,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测细胞p-EGFR表达情况.结果:龙胆草提取物具有抑制EGF刺激后的HaCaT细胞增殖作用,且与药物浓度具有正相关,与空白对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);龙胆草提取物具有促进EGF刺激后的HaCaT细胞的凋亡作用,且与药物浓度具有正相关;龙胆草提取物具有抑制EGF刺激后的HaCaT细胞p-EGFR表达作用,且与药物浓度具有正相关.结论:清热类中药龙胆草治疗银屑病的作用与抑制角质形成细胞的过度增殖,促进细胞的凋亡有关,且上述作用机制可能通过抑制p-EGFR的表达实现.

摘要： 目的:探索龙胆草提取物对EGF刺激后的naCaT细胞增殖和凋亡及p-E6FR表达的影响.方法:取不同浓度龙胆草提取物作用于EGF刺激24h后的HaCat细胞,用MTT法检测细胞增殖率,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测细胞p-EGFR表达情况.结果:龙胆草提取物具有抑制EGF刺激后的HaCaT细胞增殖作用,且与药物浓度具有正相关,与空白对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05);龙胆草提取物具有促进EGF刺激后的HaCaT细胞的凋亡作用,且与药物浓度具有正相关;龙胆草提取物具有抑制EGF刺激后的HaCaT细胞p-EGFR表达作用,且与药物浓度具有正相关.结论:清热类中药龙胆草治疗银屑病的作用与抑制角质形成细胞的过度增殖,促进细胞的凋亡有关,且上述作用机制可能通过抑制p-EGFR的表达实现.

摘要： 本发明公开了一株具有缓解HaCaT细胞氧化损伤作用的动物双歧杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)CCFM1155，其能够缓解人细胞氧化损伤，显著提高H

摘要： 本发明公开了啤酒酵母菌提取物对UVB损伤的人HSF和Hacat细胞的修复的应用，包括以下步骤：1）人的皮肤细胞HSF和Hacat紫外UVB损伤模型的建立：a）人正常皮肤细胞即HSF细胞和人永生化表皮角质细胞即Hacat细胞的培养；b)紫外线照射损伤HSF细胞和Hacat细胞：采用小剂量，即5mJ/cm2，多次照射，UVB总剂量40mJ/cm2时，得到损伤后的人的皮肤细胞；c)检测：显微镜下观察细胞形态，测定细胞相对存活率；2）用含有1%FBS的DMEM继续培养受损伤的HSF细胞和Hacat细胞，并加啤酒酵母菌提取物作用24h后，测相关皮肤活力指标SOD和MDA。啤酒酵母菌提取物对护肤和皮肤修复效果明显，且基本无毒，具备高稳定性和耐存储的特点，可以应用于防晒和修复晒伤护肤产品的开发。

摘要： 本发明公开了一株能够抑制HaCaT细胞异常增殖的副干酪乳杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1147，此副干酪乳杆菌CCFM1147能够缓解银屑病，具体体现在：抑制银屑病样皮质形成细胞的过度增殖；抑制银屑病样皮质形成细胞中NF‑kB信号通路的激活；降低银屑病样皮质形成细胞中促炎因子IL‑6的水平；降低银屑病样皮质形成细胞中促炎因子IL‑8的水平，可见，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1147在制备预防和/或治疗银屑病的产品(如日化用品或药品等)中具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种白纹伊蚊唾液34K2重组蛋白促进登革病毒增殖的作用，其制备方法包括rAb‑34K2蛋白能促进DENV2在HaCaT细胞中增殖。其机制是抑制感染DENV2的HaCaT细胞表达Ⅰ型干扰素IFN‑α/β促进病毒增殖，同时rAb‑34K2蛋白能诱导感染DENV2的HaCaT细胞发生凋亡，对研究白纹伊蚊唾液蛋白组分在蚊虫传病机制中具有重要意义。

摘要： 本发明涉及PARP‑1shRNA重组慢病毒载体、该载体稳定转染HaCaT的细胞系及其应用。本发明提供了一种重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体是在pLVX‑ShRNA2‑puro载体质粒的多克隆位点中插入了PARP‑1shRNA片段，其中所述PARP‑1shRNA片段中含有SEQ ID NO：1所示的序列。将包装后的慢病毒转染至HaCaT细胞，获得4株稳定表达PARP‑1shRNA的单克隆细胞系。Western Blot结果显示本发明构建的单克隆细胞系敲降效率高。本发明构建的稳定敲降PARP‑1的HaCaT单克隆细胞系，可用于预防或治疗皮肤癌药物的筛选及正常皮肤细胞DNA损伤机制的研究。

摘要： 本发明公开了啤酒酵母菌提取物对UVB损伤的人HSF和Hacat细胞的修复的应用，包括以下步骤：1）人的皮肤细胞HSF和Hacat紫外UVB损伤模型的建立：a）人正常皮肤细胞即HSF细胞和人永生化表皮角质细胞即Hacat细胞的培养；b)紫外线照射损伤HSF细胞和Hacat细胞：采用小剂量，即5mJ/cm2，多次照射，UVB总剂量40mJ/cm2时，得到损伤后的人的皮肤细胞；c)检测：显微镜下观察细胞形态，测定细胞相对存活率；2）用含有1%FBS的DMEM继续培养受损伤的HSF细胞和Hacat细胞，并加啤酒酵母菌提取物作用24h后，测相关皮肤活力指标SOD和MDA。啤酒酵母菌提取物对护肤和皮肤修复效果明显，且基本无毒，具备高稳定性和耐存储的特点，可以应用于防晒和修复晒伤护肤产品的开发。

摘要： 本发明公开了一株具有缓解HaCaT细胞氧化损伤作用的动物双歧杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)CCFM1155，其能够缓解人细胞氧化损伤，显著提高H2O2诱导的HaCaT细胞的存活率及HaCaT细胞的抗氧化能力；显著改善H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤程度，能够激活Nrf2抗氧化信号通路，提高分泌Nrf2能力，从而明显缓解和修复H2O2诱导的HaCaT细胞氧化造成的伤害，因此，动物双歧杆菌CCFM1155在制备预防或治疗皮肤氧化损伤的产品中，具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明公开了一株能够抑制HaCaT细胞异常增殖的副干酪乳杆菌，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1147，此副干酪乳杆菌CCFM1147能够缓解银屑病，具体体现在：抑制银屑病样皮质形成细胞的过度增殖；抑制银屑病样皮质形成细胞中NF‑kB信号通路的激活；降低银屑病样皮质形成细胞中促炎因子IL‑6的水平；降低银屑病样皮质形成细胞中促炎因子IL‑8的水平，可见，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CCFM1147在制备预防和/或治疗银屑病的产品(如日化用品或药品等)中具有巨大的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种靶向高危型HPV高频整合位点处人基因组序列的sgRNA和HaCaT细胞模型的制备。本发明针对HPV16在13q22和HPV18在8q24区域的整合位点分别设计特异性的sgRNA，并得到sgRNA双链DNA，将sgRNA双链引物分别与CRISPR/Cas9载体连接获得sgRNA表达载体，筛选得到sgRNA打靶质粒；运用克隆构建及PCR扩增分别合成含有高危型人乳头状瘤病毒HPV基因的线性Donor片段，与sgRNA打靶质粒共转染HaCaT细胞，获得HPV基因定点整合的HaCaT细胞模型。本发明运用CRISPR/Cas技术建立的HPV16及HPV18在人基因组高频位点整合的细胞模型，促进了HaCaT细胞的生长增殖，为高危型HPV整合在宫颈癌发病中的机制研究提供新的方法。

摘要： 本实用新型提供一种HaCaT细胞株构建用细胞培养皿架，涉及细胞培养技术领域，包括底座层、依次叠放于底座层上方的若干放置层以及设于放置层上方的盖板；底座层和放置层均包括放置板，放置板的边缘由弧形边和直线边相连构成，放置板的弧形边处设有挡板，放置板的直线边外侧设有限位板，限位板底部中央固接有连杆，连杆连接弹簧的一端，放置板底部设有容纳弹簧和连杆的空腔，空腔的端部设有端块，弹簧的另一端与端块固定连接；盖板的顶部中央设有提手，盖板上设有位于提手正下方及两侧的透气孔。本实用新型可存放多个培养皿，占用面积小，培养皿间不直接接触，安放牢固性高，取放方便。