分离地龙DNA裂解蛋白过程中组织破碎法、pH及温度的选择

摘要

目的 观察分离过程中三种处理方法制备的地龙组织匀浆及pH、温度对地龙DNA裂解蛋白(EWDNase)的影响. 方法 采用糖溶解法、机械法和超声破碎法制备地龙组织匀浆;不同温度、pH条件下进行EWDNase的粗提取.测定地龙组织匀浆及不同温度、pH条件下制备的粗提取液中EWDNase活性和蛋白含量,计算其比活性. 结果 三种方法获得地龙组织匀浆中EWDNase比活性大小无显著性差异(P>0.05);EWDNase耐热(75 ℃,30 min仍有活性),pH 3.4-5.4具有较高比活性. 结论 机械法因其操作简便、经济实用、误差小、重复性高可以用来处理地龙组织制备组织匀浆.提取EWDNase过程中宜采用酸性缓冲体系和较高温度(65-75 ℃)的热变性条件.