人羊膜上皮细胞原代培养及肝细胞特异性蛋白的表达

摘要

目的完善人羊膜上皮细胞(AECs)的原代培养技术,检测肝细胞特异性蛋白在AECs中的表达。方法采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法分离获取AECs并进行原代培养。分别向培养液中添加10、20、40ng/mL表皮生长因子(EGF)和10ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,从中选择最适宜AECs原代培养的细胞培养液。以培养液中未添加生长因子的原代培养细胞作为对照。将羊膜组织石蜡切片和AECs细胞爬片进行免疫组化染色,检测4种肝细胞特异性蛋白的表达,分别为白蛋白(Alb)、细胞角蛋白-18(CK-18)、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和α-1-甲胎蛋白(AFP)。结果经胶原酶-胰蛋白酶联合消化法获得大量较纯的AECs,间杂少数间充质细胞。当细胞培养液中添加10ng/mLEGF时,AECs生长和增殖速度显著加快,故最终选择添加10ng/mL EGF配制细胞培养液。免疫化学染色显示,羊膜组织和体外传代培养的AECs中均有Alb、CK-18、AAT和AFP表达。结论胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10ng/mL的EGF是AECs较为适宜的原代培养方法。人羊膜组织及体外培养AECs能表达肝细胞特异性蛋白,提示AECs具有肝细胞的部分生物学特性。