ADAM33对人气道平滑肌细胞增殖、凋亡的作用及IL-4对其表达的影响

摘要

目的 探讨解整合素-金属蛋白酶33 (ADAM33)对人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖和凋亡的作用,以及白介素-4(IL-4)对ADAM33表达的影响.方法 分别以1、10、50和100 ng/mL浓度的IL-4刺激HASMCs,以未刺激细胞组作为对照,分别采用Real-Time PCR和Western blotting法检测ADAM33 mRNA和蛋白的表达.设计并合成ADAM33-siRNA,瞬时转染HASMCs,Real-Time PCR法和Western blotting法筛选出抑制率最高的siRNA,以抑制率最高的siRNA瞬时转染HASMCs;MTS和流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况.结果 当不同浓度的IL-4刺激HASMCs时,ADAM33 mRNA和蛋白的表达均呈浓度依赖性.与对照组比较,IL-4浓度为50 ng/mL组和100 ng/mL组mRNA和蛋白的相对表达量分别增加了5.94、7.6倍和3.72、4.57倍,差异均有统计学意义(P＜0.05);但1 ng/mL组和10 ng/mL组无明显升高,差异均无统计学意义(P＞0.05).在3条干扰RNA中,ADAM33-siRNA-575的抑制效率最高,在mRNA水平的抑制率为81.08％.在24、48和72 h,干扰组的细胞增殖明显低于阴性对照组(P＜0.05),增殖抑制率分别为15.38％、32.83％和22.78％;干扰组的细胞凋亡率为(25.88 ±3.37)％,明显高于阴性对照组的(8.95±0.51)％(P＜0.05).结论 ADAM33可促进HASMCs增殖,而细胞因子IL-4可促进其表达,两者可能在气道重塑中起着重要的作用.