气道平滑肌细胞

摘要： 目的探讨白果内酯对组胺诱导的气道平滑肌细胞(ASMC)蛋白激酶B/核因子κB/细胞周期蛋白D1(AKT/NF-κB/cyclin D1)信号通路及凋亡的影响。方法体外培养人ASMC细胞,MTT法检测不同浓度组胺对ASMC细胞增殖的影响。将ASMC细胞分为对照组(不进行处理)、组胺组(100μmol/L组胺)、低剂量白果内酯组(100μmol/L组胺+2μmol/L白果内酯)、中剂量白果内酯组(100μmol/L组胺+4μmol/L白果内酯)和高剂量白果内酯组(100μmol/L组胺+8μmol/L白果内酯),MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞中p-AKT、AKT、p-NF-κB p65、NF-κB p65、cyclin D1蛋白表达情况。结果与0μmol/L比较,100、1000μmol/L组胺处理下ASMC细胞OD值显著升高(P<0.05)。与对照组比较,组胺组ASMC细胞OD值、上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平及细胞中p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、cyclin D1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。随着白果内酯的处理及剂量的升高,ASMC细胞OD值、上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平及细胞中p-AKT/AKT、p-NF-κB p65/NF-κB p65、cyclin D1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。结论白果内酯可以抑制组胺诱导的ASMC细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制AKT/NF-κB/cyclin D1信号通路激活有关。

摘要： 目的:探讨黄芩素调控miR-625-5p表达对支气管哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及炎性因子的影响。方法:培养小鼠原代ASMCs细胞,作为对照组,重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖,作为PDGF组;分别采用10、20、40μmol/L的黄芩素处理PDGF诱导ASMCs细胞。将miR-NC、miR-625-5p转染至PDGF诱导的ASMCs细胞,作为PDGF+miR-NC、PDGF+miR-625-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-625-5p转染至PDGF诱导ASMCs细胞,以40μmol/L的黄芩素处理,作为PDGF+anti-miR-NC+40μmol/L组、PDGF+anti-miR-625-5p+40μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移;酶联免疫吸附实验检测细胞IL-4、IL-6、IL-8水平;实时荧光定量PCR检测细胞miR-625-5p表达水平。结果:与对照组比较,PDGF组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05);与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,PDGF组细胞miR-625-5p表达显著降低(P<0.05);与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞miR-625-5p表达显著升高(均P<0.05)。与PDGF+miR-NC组比较,PDGF+miR-625-5p组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与PDGF+anti-miR-NC+40μmol/L组比较,PDGF+anti-miR-625-5p+40μmol/L组细胞miR-625-5p表达水平显著降低,细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-625-5p表达抑制支气管哮喘小鼠的细胞增殖率、迁移率以及炎性因子水平。

摘要： 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对气道平滑肌细胞的影响。方法选取2016年10月至2018年10月邯郸市中心医院收治的56例支气管哮喘急性发作期患儿,及56例同期健康体检儿童。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测支气管哮喘患儿和健康儿童血浆lncRNA CCAT1表达水平。Lipofectamine 2000^(TM)法构建lncRNA CCAT1过表达、低表达人气管平滑肌细胞系(分别记为pc-CCAT1组、si-CCAT1组),同时设置相应阴性对照(分别为pc-NC组、si-NC组),使用qRT-PCR进行验证;CCK-8实验、BrdU实验分别检测细胞活力、增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果哮喘组儿童血浆lncRNA CCAT1表达高于健康组(P<0.001),pc-CCAT1组细胞中lncRNA CCAT1表达水平高于pc-NC组(P<0.001),si-CCAT1组细胞中lncRNA CCAT1的表达水平低于si-NC组(P<0.05)。48、72、96小时,pc-CCAT1组细胞的OD值高于pc-NC组(P<0.001),si-CCAT1组细胞的OD值低于si-NC组(P<0.001)。与pc-NC组相比,pc-CCAT1组BrdU阳性细胞百分比、细胞迁移率、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-CCAT1组BrdU阳性细胞百分比、细胞迁移率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.001)。结论支气管哮喘患儿血浆CCAT1表达上调,lncRNA CCAT1参与气道平滑肌细胞的增殖、迁移和凋亡过程。

摘要： 目的研究淫羊藿女贞子含药血清合用地塞米松对自噬激活剂雷帕霉素(Rap)诱导的气道平滑肌细胞(ASMCs)自噬、凋亡及增殖活性的影响。方法培养大鼠原代ASMCs,随机分为5组,即正常组(正常大鼠血清)、Rap组(正常大鼠血清+Rap)、激素组(正常大鼠血清+地塞米松+Rap)、中药组(Rap+淫羊藿、女贞子含药血清)、合用组(Rap+淫羊藿、女贞子含药血清+地塞米松)。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入Rap刺激ASMCs,48 h后进行检测。电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白Ki-67蛋白表达并评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性;Western blotting检测LC3蛋白相对表达;细胞免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Beclin-1、P53、Caspase-3、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果激素可协同Rap诱导ASMCs自噬活性增加,使LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值进一步增加,下调p-mTOR表达,但对Beclin-1及m TOR表达无影响,抑制ASMCs细胞活力及增殖活性,可增加凋亡水平,上调Bax、Caspase-3及P53表达,下调Bcl-2表达。中药组及合用组均能显著抑制Rap诱导的ASMCs自噬,下调LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值及Beclin-1蛋白表达,并改善Rap导致的细胞活力、增殖活性降低。此外中药能抑制凋亡活性升高,上调Caspase-3蛋白表达,下调P53蛋白表达;中西药合用能下调p-mTOR蛋白表达,但对凋亡活性无显著影响。与激素单用比较,合用组下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,调节ASMCs细胞活力、增殖活性及凋亡活性均有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。结论中药联合糖皮质激素可抑制激素协同Rap诱导的ASMCs过度自噬状态,并改善被抑制的细胞活性,使ASMCs趋于正常。

摘要： 目的:探讨抑制miR-155表达对慢性阻塞性肺病(COPD)患者气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖和迁移的影响.方法:分离培养来自8例COPD患者(观察组)和3例无COPD病史肺部良性肿瘤患者(对照组)的ASMCs.将miR-155抑制表达质粒(anti-miR-155)和阴性对照质粒(anti-miR-NC)转染至ASMCs,同时设置空白组.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-155表达水平;流式细胞仪检测细胞周期;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果:观察组ASMCs中miR-155表达水平明显高于对照组(P<0.05).抑制miR-155表达组miR-155表达水平明显低于阴性对照组和空白组(P<0.05).抑制miR-155表达组,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞比例而降低,细胞克隆数及迁移、侵袭细胞数降低,TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05).结论:抑制miR-155的表达可抑制COPD患者气道平滑肌细胞增殖、迁移,抑制促炎因子的释放.

摘要： 目的 探究灯盏花素通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/TNF受体(TNFR)/核因子-κB(NF-κB)通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响.方法 45只小鼠分为对照组、COPD组和COPD+灯盏花素组,每组15只,通过鼻腔滴入脂多糖(LPS)和香烟环境诱导COPD模型,灯盏花素(48 mg/kg)腹腔注射干预.比较3组气道阻力、气管损伤情况、增殖细胞核抗原(PCNA)水平、TNF-α/TNFR/NF-κB途径转录和翻译的水平.将ASMC分为空白组、模型组、模型+灯盏花素组和模型+灯盏花素+EVP4593组,通过EdU法检测各组细胞活力和增殖能力.结果 COPD组50 mg/mL和100 mg/mL条件下的气道阻力[(9.94±1.67)cm H2O×s/mL,(18.94±2.13)cm H2O×s/mL]、气管损伤情况、PCNA表达水平、TNF-αmRNA、TNFRmRNA、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05).COPD+灯盏花素组的气道阻力[(7.15±1.28)cm H2O×s/mL,(13.78±1.86)cm H2O×s/mL]、气管损伤情况、PCNA表达水平、TNF-α、TNFR、NF-κB mRNA和蛋白表达水平显著低于COPD组(P<0.05).ASMC 4组增殖情况比较差异显著(P<0.05).其中模型组的增殖率(41.26±3.58％)显著高于空白组(15.85±1.87％)(P<0.05),模型+灯盏花素组的增殖率(30.64±3.06％)显著低于模型组(P<0.05),模型+灯盏花素+EVP4593组的增殖率(22.18±4.02％)显著低于模型+灯盏花素组(P<0.05).结论 灯盏花素可能通过抑制TNF-α/TNFR/NF-κB通路抑制ASMC的增殖,进而减少气道阻力.

摘要： 目的 观察木姜子和忍冬藤配伍醇提物减轻哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖的作用及探讨其可能的起效机制.方法 将健康清洁级昆明种小鼠随机分为空白组,模型组,木姜子和忍冬藤配伍醇提物低、中、高剂量组5组,每组10只.模型组,木姜子和忍冬藤配伍醇提物低、中、高剂量组采用卵清蛋白腹腔注射致敏+雾化吸入激发法建立哮喘小鼠模型.木姜子和忍冬藤配伍低、中、高剂量组每天给予木姜子和忍冬藤的醇提物(剂量分别为5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg)灌胃,其余各组给予等量的生理盐水,均是每天1次,连续干预7 d.干预结束后,ELISA法检测血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源生长因子(PDGF)水平,HE染色观察肺组织形态学变化,Western blot法检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组TGF-β1、IL-4、IL-13、VEGF、PDGF水平及Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,低、中、高各剂量组TGF-β1、IL-4、IL-13、VEGF、PDGF水平及Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);肺组织形态学变化显示各剂量组能够改善肺组织细胞炎性浸润病理变化.结论 木姜子和忍冬藤配伍醇提物可降低TGF-β1、IL-4、IL-13、VEGF、PDGF水平及Cyclin D1、ERK1/2蛋白表达水平,其起效机制与抑制气道平滑肌细胞的增殖有关.

摘要： 本研究设计并制备了一种基于PDMS微弦结构的细胞力学测量装置.将平滑肌微组织培养在该柔性微型传感器上,通过检测PDMS微结构因微组织牵拉作用而产生的形变,实现了对其收缩力动态的测量.利用临床抗哮喘药物,我们验证了该装置的灵敏度和可靠性.该方法的建立将将有助于未来筛选平滑肌舒张作用药物.

摘要： 目的 探讨lncRNA TUG1对哮喘患儿气道平滑肌细胞凋亡和炎症因子的影响及其分子机制.方法 收集2017年1月～2020年6月我院收治的支气管哮喘患儿和非哮喘患儿气道平滑肌组织;分离培养气道平滑肌细胞(ASMCs),将其分为si-NC组、si-TUG1组、miR-mimics-NC组、miR-326-mimics组、si-NC+miR-inhibitor-NC组、si-TUG1+ miR-inhibitor-NC组及si-TUG1+miR-326 inhibitor组.实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测TUG1和miR-326表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-4、IL-5、IL-13水平;双荧光素酶报告实验验证TUG1和miR-326的靶向关系.结果 哮喘患儿气道平滑肌组织中TUG1表达水平升高,miR-326表达水平降低(P＜0.05).沉默lncRNA TUG1或过表达miR-326后,ASMCs中细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,IL-4、IL-5、IL-13水平降低(均P＜0.05).TUG1靶向负调控miR-326,干扰miR-326能逆转沉默TUG1对气道平滑肌细胞凋亡及炎症因子的影响.结论 沉默lncRNA TUG1可通过靶向调控miR-326促进哮喘患儿气道平滑肌细胞凋亡,抑制炎症因子的释放.

摘要： 目的:探究黄芩素对哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及Janus蛋白酪氨酸激酶(JAK)/信号转导和转录活化蛋白(STAT)通路的影响.方法:取小鼠原代ASMCs进行分离与培养,采用重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导小鼠ASMCs增殖,分别加入不同浓度的黄芩素(0μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L).另设对照组、JAK/STAT信号通路激活剂白介素6(IL-6)与黄芩素联用组(50 ng/ml的IL-6和40 μmol/L的黄芩素),于培养箱中继续培养48 h.MTT法检测ASMCs增殖情况;划痕愈合实验检测ASMCs迁移能力;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-6、IL-8水平;蛋白免疫印迹(western blot)检测JAK2、STAT3及其磷酸化蛋白表达.结果:与对照组相比,PDGF组细胞增殖率、迁移率、IL-6、IL-8水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著升高(P＜0.05);与PDGF组相比,20μmol/L、40 μmol/L黄芩素组细胞增殖率、迁移率、IL-6水平、IL-8水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达明显降低(P＜ 0.05);IL-6+40μmol/L黄芩素联用组能明显逆转黄芩素对ASMCs增殖、迁移及炎性因子、JAK2/STAT3通路的抑制作用(P＜0.05).结论:黄芩素可抑制哮喘小鼠气道平滑肌细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关.

摘要： 目的：观察平喘颗粒对外泌体的分泌及miR-23b介导的气道平滑肌细胞增殖的影响. 方法：通过构建哮喘小鼠模型并以空白小鼠为对照组,观察不同处理方式下小鼠肺泡灌洗液中外泌体的分泌及外泌体中miR-23b的表达;通过外泌体干预气道平滑肌细胞,分别检测平滑肌细胞的增殖、凋亡.及细胞中TβRⅡ蛋白的表达. 结果：与空白组比较,模型组外泌体数量、标记蛋白Alix、TSG101、CD9、CD63的表达、平滑肌细胞的增殖及TβRⅡ蛋白的表达显著增加,miR-23b的表达和ASMCs的凋亡显著降低(P＜0.01);与模型组比较,平喘颗粒显著降低外泌体数量、Alix、TSG101、CD9、CD63的表达、平滑肌细胞的增殖及TβRⅡ蛋白的表达,增加miR-23b的表达和ASMCs的凋亡(P＜0.01). 结论：平喘颗粒能够促进外泌体中miR-23b的表达,进而下调ASMCs中TβRⅡ蛋白的表达,调控ASMCs增殖和凋亡,阻止哮喘气道重塑.

摘要： 目的:探讨参麦注射液(SMI)对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达的影响. 方法:将30只6周龄雄性SPF级大鼠随机分为三组:对照组、哮喘组和SMI治疗组,每组10只.哮喘组和SMI治疗组应用卵蛋白建立哮喘模型,SMI治疗组造模同时腹腔内每天注射2ml SMI.末次激发后留取肺组织.HE染色后显微镜下观察完整的肺内支气管横断面,计算管壁面积(WA)/管腔内周长(Pi)、支气管平滑肌面积(S)/Pi、支气管平滑肌细胞核数(N)/Pi.采用免疫组化染色和免疫荧光染色鉴定气道平滑肌细胞,分别采用Real-Time PCR和Western blotting法检测ASMCs中TRPA1mRNA和蛋白质的表达,采用CCK-8法检测ASMCs的增殖. 结果:与对照组大鼠气道WA/Pi(6.88±0.32)、S/Pi(2.43±0.26)、N/Pi(0.0179±0.0037)相比,哮喘组大鼠气道WA/Pi(12.14±1.51)、S/Pi(3.82±0.49)、N/Pi(0.0407±0.0181)明显增高(P＜0.05);SMI治疗组大鼠气道WA/Pi(7.07±0.40)、S/Pi(2.58±0.36)、N/Pi(0.0183±0.0046)低于哮喘组大鼠(P＜0.05).与正常对照组大鼠ASMCs中TRPA1mRNA(1.03±0.07)和蛋白质(1.05±0.09)的表达相比,哮喘组大鼠ASMCs中TRPA1mRNA(2.03±0.58)和蛋白质(1.96±0.55)的表达增加(P＜0.05);与哮喘组大鼠相比,SMI治疗组大鼠ASMC中的TRPA1mRNA(1.05±0.11)和蛋白质(1.02±0.16)的表达明显减少(P＜0.05).与对照组大鼠ASMCs中A450值(0.316±0.032)相比,哮喘组大鼠ASMCs中A450值(0.622±0.091)明显增加(P＜0.05);与哮喘组大鼠相比,SMI治疗组大鼠ASMCs中A450值(0.298±0.026)明显降低(P＜0.05). 结论:SMI可能通过抑制TRPA1通道的表达来防治哮喘诱发的ASMC过度增殖.

摘要： 目的：观察蠲哮汤含药血清对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,缩写ASMC)增殖的影响. 方法：25只SPF级雌性SD大鼠,随机分为5组,分别制备含药血清,采用MTT比色法检测各组含药血清对ASMC增殖的影响. 结果：不同剂量蠲哮汤含药血清处理前后不同时间之间有显著差异(F=123.387,P＜0.001);在不同的时间点上A570nm值均低于对照组,其中浓度1.44g/kg的蠲哮汤含药血清对ASMC的作用最明显,其在72h的OD值最小为0.656,同时,不同药物浓度与不同时间点之间存在交互效应(F=87.969,P＜0.001). 结论：蠲哮汤含药血清对ASMC增殖有明显的抑制作用,蠲哮汤含药血清对大鼠ASMC增殖的抑制效应呈明显的时间-剂量依赖关系.

摘要： 目的：观察蠲哮汤含药血清对大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,缩写ASMC)增殖的影响. 方法：25只SPF级雌性SD大鼠,随机分为5组,分别制备含药血清,采用MTT比色法检测各组含药血清对ASMC增殖的影响. 结果：不同剂量蠲哮汤含药血清处理前后不同时间之间有显著差异(F=123.387,P＜0.001);在不同的时间点上A570nm值均低于对照组,其中浓度1.44g/kg的蠲哮汤含药血清对ASMC的作用最明显,其在72h的OD值最小为0.656,同时,不同药物浓度与不同时间点之间存在交互效应(F=87.969,P＜0.001). 结论：蠲哮汤含药血清对ASMC增殖有明显的抑制作用,蠲哮汤含药血清对大鼠ASMC增殖的抑制效应呈明显的时间-剂量依赖关系.

摘要： 目的：探讨尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞(RASMC)增殖的作用.rn 方法：将不同浓度的尼古丁作用于RASMC 24和48 h,应用细胞计数法检测RASMC的增殖变化.将不同浓度尼古丁作用于RASMC 24h,应用流式细胞术检测细胞周期变化.1×10-5 mol/L尼古丁分别作用于RASMC 12、16、20和24 h,用Western blot法检测cyclin D1的表达水平.rn 结果：尼古丁刺激组细胞计数均明显高于对照组,且尼古丁的促增殖作用与浓度和作用时间具有相关性.不同浓度的尼古丁暴露24 h,RASMC计数增加倍数为1.27～1.41,差异均有统计学意义(P＜0.05).尼古丁暴露48 h,RASMC计数增加倍数为1.32～1.54,差异均有统计学意义(P＜0.05).rn 结论：尼古丁通过上调cyclin D1促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖。

摘要： 目的:气道平滑肌在支气管哮喘的气道重塑和气道气道高反应起关键的作用,通过气道热成形术去除气道平滑肌细胞可有效地控制哮喘发作.如何用药物来诱导气道平滑肌细胞凋亡以逆转气道重塑减轻气道高反应是目前哮喘研究的热点之一.香叶酰香叶酰基转移Ⅰ(Geranylgeranyl transferaseⅠ,GGTⅠ)是参与真核细胞内信号蛋白转录后修饰必须的一种酶,具有调节气道平滑肌细胞自噬和凋亡的作用.氯喹是一种自噬抑制剂,已应用于诱导抗药肿瘤细胞的凋亡.推测氯喹可通过抑制GGTⅠ的表达而诱导人气道平滑肌细胞凋亡.rn 方法:体外实验中采用人气道平滑肌细胞爬片,培养液中加入不同浓度的氯喹(0μM,50μM,100μM,150μM,200μM)孵育24小时,并用100μM的氯喹分别孵育0小时,12小时,24小时,48小时和72小时,TUNEL法检测人气道平滑肌细胞凋亡情况,观察氯喹诱导人气道平滑肌的凋亡效果.免疫印迹检测氯喹100μM分别孵育0小时,12小时,24小时,48小时和72小时的平滑肌细胞中p62蛋白和p53蛋白的表达水平.RT-PCR检测氯喹100μM孵育24小时和空白对照的人气道平滑肌细胞中GGT ⅠmRNA水平.rn 结果:氯喹在体外具有诱导人气道平滑肌细胞凋亡的作用且具有时间依赖性和剂量依赖性的特点;氯喹100μM孵育人气道平滑肌p62蛋白和p53蛋白的表达水平随时间的延长逐渐升高;氯喹抑制人气道平滑肌细胞的GGT Ⅰ的表达.rn 结论:首次证明自噬抑制剂氯喹通过抑制GGT Ⅰ的表达激活p53凋亡通路而诱导人气道平滑肌细胞的凋亡.氯喹类药物在慢性气道炎症引起的气道重塑方面的治疗价值值得进一步研究.

摘要： 气道平滑肌在支气管哮喘的气道重塑和气道气道高反应起关键的作用,通过气道热成形术去除气道平滑肌细胞可有效地控制哮喘发作.如何用药物来诱导气道平滑肌细胞凋亡以逆转气道重塑减轻气道高反应是目前哮喘研究的热点之一.香叶酰香叶酰基转移Ⅰ(geranylgeranyl transferase Ⅰ,GGTⅠ)是参与真核细胞内信号蛋白转录后修饰必须的一种酶,具有调节气道平滑肌细胞自噬和凋亡的作用.氯喹是一种自噬抑制剂,已应用于诱导抗药肿瘤细胞的凋亡,推测氯喹可通过抑制GGTⅠ的表达而诱导人气道平滑肌细胞凋亡.本实验中采用人气道平滑肌细胞爬片,培养液中加入不同浓度的氯喹(0、50、100、150和200 μM)孵育24 h,并用100 μM氯喹分别孵育0、12、24、48和72 h,TUNEL法检测人气道平滑肌细胞凋亡情况,观察氯喹诱导人气道平滑肌的凋亡效果.免疫印迹检测氯喹100μM分别孵育0,12,24,48和72 h的平滑肌细胞中p62蛋白和p53蛋白表达水平。RT-PCR检测氯喹100μM孵育24h和空白对照的人气道平滑肌细胞中GGTⅠ mRNA水平。结果表明，氯哇在体外具有诱导人气道平滑肌细胞凋亡的作用，且具有时间依赖性和剂量依赖性的特点，氯喹100μM孵育人气道平滑肌p62蛋白和p53蛋白的表达水平随时间延长逐渐升高，氯喹抑制人气道平滑肌细胞的GGTⅠ表达。结论:本研究证明，自噬抑制剂氯喹通过抑制GGTⅠ的表达激活p53凋亡通路而诱导人气道平滑肌细胞的凋亡。氯喹类药物在慢性气道炎症引起的气道重塑方面的治疗价值值得进一步研究。

摘要： 目的：本研究探讨尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞(RASMC)增殖的作用.rn 方法：①不同浓度的尼古丁作用RASMC 24h,48h,应用细胞计数法检测RASMC的增殖变化;②不同浓度的尼古丁作用RASMCs 24h,应用流式细胞术检测细胞周期变化;③1×10-5mol/l尼古丁分别作用RASMCs 12h,16h,20h,24h,Western blot检测Cyclin D1的表达水平.rn 结果：①尼古丁刺激组细胞计数均明显高于对照组,且尼古丁的促增殖作用与浓度和作用时间具有相关性.1×10-4mol/l,1×10-5mol/l,1×10-6mol/l,1×10-7mol/l尼古丁暴露24h,以对照组细胞计数值为1,RASMCs计数增加倍数分别为1.30,1.27,1.41,1.38,均差异显著(P＜0.05);尼古丁暴露48h,RASMCs计数增加倍数分别为1.37,1.32,1.54,1.53,均差异显著(P＜0.05).②以流式细胞术检测细胞周期G1、G2及S期细胞分数,各浓度尼古丁组均促进细胞周期S期的细胞分数,与对照组相比明显升高,具有统计学意义.以对照组细胞周期S期的细胞分数值为1,1×10-7mol/l-1×10-4mol/l尼古丁暴露24h,S期的RASMCs细胞分数增加倍数分别为1.53,2.35,3.83,2.86,均差异显著(P＜0.05).③1×10-5mol/l尼古丁作用细胞12h,16h,20h,24h后,在12h时间点,RASMCs的Cyclin D1表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).rn 结论：尼古丁能够通过上调Cyclin D1促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖.

摘要： 目的：观察畅肺防喘方含药血清对体外培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响。方法：原代培养大鼠ASMC，分为不同浓度的畅肺防喘方组、地塞米松组、病理模型组及空白对照组，血清药理学方法制备含药血清，MTT法测定含药血清对ASMC增殖的影响。结果：畅肺防喘方含药血清能显著降低培养的大鼠ASMC MTT法OD值，与空白血清组比较有显著性差异(P0.01)。结论：畅肺防喘方可以通过抑制ASMC增殖起到抗哮喘的作用，并存在一定的量效关系。

摘要： 本发明公开了一种可调控细胞粘附的材料，由基底材料和涂层组成，所述涂层的制备方法包括：(1)分别配制聚阳离子电解质溶液和聚阴离子电解质溶液；(2)将基底材料浸泡于聚阳离子电解质溶液中，取出后洗涤除去聚阳离子电解质溶液；(3)将步骤(2)中得到的基底材料浸泡于聚阴离子电解质溶液中，取出后洗涤除去聚阴离子电解质溶液；(4)重复步骤(2)和步骤(3)若干次后，得到聚电解质组装涂层；所述涂层的厚度为1nm～10μm。该材料无需负载生物活性因子就可调控细胞的粘附程度，实现材料周围细胞粘附程度的改变，与现有技术相比，本发明材料更加安全和稳定。

摘要： 本发明公开了一种小分子化合物组合及利用该小分子化合物组合诱导分化的细胞制备血管平滑肌细胞的方法。所述小分子组合包括按时序分开使用的第一阶段小分子化合物和第二阶段小分子化合物，所述第一阶段小分子化合物包括DNMT抑制剂和赖氨酸脱乙酰基酶抑制剂中的至少一种；所述第二阶段小分子化合物包括WNT/β‑catenin激动剂，cAMP激动剂和TG F‑beta受体抑制剂。本发明通过小分子化合物分阶段诱导，能够将分化的细胞转分化为血管平滑肌细胞，各步骤可实现精准质控，便于标准化操作和规模化生产。本发明提供的方法供体来源广泛，患者本人即是理想供体，可在较短时间内获得基础研究、临床治疗或组织工程生产所需的足够数量的血管平滑肌细胞。

摘要： 本发明属于微流控技术领域，提出了一种内皮细胞‑平滑肌细胞共培养的单流道微芯片模型的构建方法。以动脉血管为原型建模，光刻蚀方法制作不同高度的阳模，在所形成的微通道中依次培养平滑肌细胞和内皮细胞制得内皮细胞‑平滑肌细胞分层培养的单流道微芯片模型。本构建方法改善了传统内皮细胞与平滑肌细胞共培养模式中无法使内皮细胞与平滑肌细胞在同一微流道内直接物理接触的问题以及无法在同一流动刺激下动态监测内皮细胞与平滑肌细胞细胞形态和功能改变。从细胞角度及分子表达层面直接观察流动剪切刺激下内皮细胞与平滑肌细胞相互作用以及分泌物的变化，对研究动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发生机制的研究中提供了强有力的工具。

摘要： 本发明涉及细胞培养领域，具体是一种体外诱导牙髓干细胞向膀胱平滑肌细胞分化的细胞培养方法，该细胞培养方法包括如下步骤：步骤(1)牙髓干细胞DPSCs的分离和培养；步骤(2)膀胱平滑肌细胞SMCs的分离和培养；步骤(3)膀胱平滑肌细胞SMCs条件培养液CM收集；步骤(4)筛选膀胱平滑肌细胞SMCs体外诱导培养液；步骤(5)体外诱导牙髓干细胞DPSCs向膀胱平滑肌细胞SMCs方向分化。本发明通过利用牙髓干细胞体外诱导分化为膀胱平滑肌细胞，使其能有效替代需进行膀胱扩大成形术或置换术患者的膀胱组织发挥正常功能，以期患者有更好的生活质量。

摘要： 本发明涉及一种模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型。本发明所述的模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型包括：体外共培养的原代血管内皮细胞与原代血管平滑肌细胞；Transwell小室，其底层为聚碳酸酯膜；所述原代血管内皮细胞与所述原代血管平滑肌细胞以所述聚碳酸酯膜相隔，透过所述聚碳酸酯膜形成缝隙连接。本发明所述的模拟阻力血管平滑肌细胞与内皮细胞相互作用的体外模型，在体外存活时间显著增加，达到3‑7天；该模型可重复性好，并且容易批量构建；可在单一因素刺激后，分别观察平滑肌细胞内皮细胞蛋白表达或功能变化情况；可选择性在平滑肌细胞或内皮细胞侧给药，观察其对细胞蛋白表达或功能的作用。

摘要： 本发明公开了一种动物神经系统血管平滑肌细胞单细胞的分离方法，属于生物技术领域。该方法包括：将切碎后的新鲜神经组织与细胞解离消化液混合培养后，离心，加入总细胞培养液，过滤后得到细胞混合物A；将细胞混合物A首先与内皮细胞梯度分离液混合，纯化分离得到含有血管平滑肌细胞的细胞混合物B。随后利用碘克沙醇溶液进一步分离得到纯的血管平滑肌细胞，该方法操作简便、成本低、效率高，且无需借助特定的仪器、适合工业化生产，通过该方法制备得到的神经血管平滑肌细胞单细胞可用来进行单细胞测序或者其他分析，有利于深入研究神经血管平滑肌细胞的特性。

摘要： 本发明公开了CADASIL病人特异性血管平滑肌细胞与内皮细胞的制备方法。本发明提供了一种制备CADASIL疾病细胞模型的方法，包括如下步骤：a)将来源于携带NOTCH3基因杂合突变的CADASIL病人的离体成纤维细胞进行重编程得到诱导多能干细胞系；b)将所述诱导多能干细胞系定向分化为血管壁细胞，得到CADASIL疾病细胞模型。本发明将利用重编程技术和定向分化技术在体外获得CADASIL患者特异的诱导多能干细胞，并将其定向分化成血管平滑肌细胞(VSMC)与血管内皮细胞(VEC)，用于研究CADASIL小动脉病变的发病机制，并为药物筛选提供平台。

摘要： 本发明提供了大鼠气道平滑肌细胞哮喘模型及其构建方法与应用。构建方法包括：1)将大鼠气道平滑肌细胞含血清培养24h后吸去旧培养液，用PBS润洗2‑3次，然后往各孔板中加入含1％P/S的DMEM‑F12无血清培养基，继续于37°C、5％CO2恒温饥饿培养24h；2)吸去旧培养液，用PBS润洗2‑3次，随后往各孔中加入含0.1％FBS及1％P/S的DMEM‑F12培养液，再往其中加入稀释至10ng/μL的IL‑13，使每孔中IL‑13的终浓度为50ng/mL，继续放置37°C，含5％CO2的恒温细胞培养箱中培养24、48h。

摘要： 本发明涉及一种大鼠气道平滑肌细胞的培养方法，其特征是：包括获取原代培养的大鼠气道平滑肌细胞和获取传代培养的大鼠气道平滑肌细胞二个步骤，其中步骤1)将大鼠气管中膜用消化液在30°C～45°C消化14～30min后收集气道平滑肌细胞，进行原代细胞培养；所述消化液由HBSS平衡盐溶液、I型胶原酶、牛血清白蛋白和二硫苏糖醇按比例配制而成。本发明培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞纯度高，形态均一，生长良好；独特配方的消化液将气道平滑肌层的消化时间控制在14-30min，克服了现有技术中因大鼠中膜平滑肌层较主动脉薄、平滑肌细胞较主动脉肺动脉少、气道平滑肌细胞萌出时间长、生长缓慢的缺点。

摘要： 本实用新型公开了一种气道上皮与气道平滑肌细胞共培养装置，属于生物实验器材领域。该细胞共培养装置包括：设有至少一个皿状空间的容器、设于容器皿状空间底面的若干根立柱、以及对应任一皿状空间内被立柱稳定在某一水平高度的尼龙网。本实用新型克服了Transwell小室气道上皮细胞生长不易控制的问题，上皮细胞可以自由穿越尼龙网，有益于共培养体系的建立；实验过程中尼龙网可以从培养皿中自由取出，用于后续实验；该培养板相对于Transwell小室大大降低实验成本，提高共培养成功率。