熊果酸对血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞内NADPH氧化酶的活化及下游信号通路的影响

摘要

目的 分析熊果酸(UA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起肝星状细胞(HSC) NADPH氧化酶(NOX)激活及其下游的PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的影响.方法 将培养激活的HSC-T6细胞株分组:对照组,不加任何药物;AngⅡ组,给予AngⅡ(1μmol/L)刺激细胞;各干预组分别给予UA(50 μmol/L)、NOX抑制剂DPI(20 μmol/L)、PI3 K/Akt信号通路抑制剂LY294002(10 μmol/L)、P38MAPK信号通路抑制剂SB203580(10 μmol/L)预处理30 min,再加入AngⅡ处理不同时间.通过Western blotting检测细胞膜上NOX亚基p47Phox蛋白、细胞总PI3K蛋白和磷酸化的Akt 、P38MAPK蛋白的表达;采用RT-PCR法检测UA对AngⅡ诱导的Ⅰ型胶原表达,CCK-8比色法检测HSC-T6的增殖率.结果 用AngⅡ处理15 min后,细胞膜上p47phox蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.05);分别给予UA及DPI进行干预后,细胞膜上p47phox蛋白的表达较AngⅡ组明显降低(P＜0.05).用AngⅡ处理30 min后,PI3K、p-Akt的蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);而分别给予UA、LY294002、DPI进行干预后,PI3K、p-Akt蛋白的表达较AngⅡ组均降低(P＜0.05).用AngⅡ处理30 min后,p-P38MAPK蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);分别给予UA、SB203580、DPI干预后,p-P38MAPK蛋白的表达较AngⅡ组明显降低(P＜0.05).AngⅡ处理12h后,Ⅰ型胶原的mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.05);分别给予UA、DPI、SB203580、LY294002干预后,Ⅰ型胶原的mRNA表达较AngⅡ组均明显降低(P＜0.05).AngⅡ刺激12、24、48 h后,细胞增殖率明显升高;分别给予UA、DPI、SB203580、LY294002干预后,细胞增殖率均低于AngⅡ组(P＜0.05).结论 UA能够通过抑制NOX活化阻断AngⅡ在肝星状细胞内的信号转导,从而抑制肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原基因的表达.