大肠杆菌VT噬菌体受体基因重组质粒的构建

摘要

取含有卡那霉素抗性 ( Kan R)基因的自杀性质粒 p JP56 0 3和含 vpr全长基因的 p U C19phiΦRID质粒 ,分别采用粘性末端及平末端两种连接法。 2种质粒 H inc 单酶切后进行平末端连接 ,经鉴定未得到重组质粒。p JP56 0 3用 H inc 和X ma I消化 ,回收 3kb的载体质粒 ,p U C19Φ RID用 H inc 和 Age 消化 ,回收 778bp vpr目的基因。通过粘性末端连接 ,转化到感受态细菌 CC118λpir,利用 Kan R进行筛选 ,获得的克隆经 Acc 酶切鉴定和 PCR检测 ,确定得到重组质粒 ,即p YYvpr。将重组质粒的 DNA转化到含有全长 vpr基因的感受态细胞 MC10 6 1,筛选到的克隆经 PCR检测 ,得到一株克隆既扩增出 vpr基因 ,又扩增出 Kan R基因 ,初步鉴定该克隆为 MC10 6 1的 vpr同源基因突变株 ,暂定名为 MC10 6 1△ vpr。从而为研究