通过差减文库筛选山羊羔肠道淋巴集结特异表达基因

摘要

羊羔肠道淋巴集合淋巴结(Peyer’s patch,以下简称PP),是B淋巴细胞的主要来源地和发育、成熟场所,兼具中枢淋巴器官和周围淋巴器官的功能.采用抑制性差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)方法,构建山羊羔肠道淋巴集结与其非PP肠壁组织的差减cDNA文库,以期找到在山羊羔肠道淋巴集结中特异表达的与免疫相关的基因.分别从山羊羔PP与非PP肠壁组织提取总RNA,反转录成cDNA,以PP作为待检组织(tester),非PP肠壁作为驱动组织(driver),经过两轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了两种组织间差异表达基因的差减cDNA文库.对其中160个克隆测序,得到几个可能与免疫相关的基因,为进一步从中挑选和表达活性蛋白基因用于生产免疫增强剂奠定了基础.