金磁微粒介导的抗六聚组氨酸多克隆抗体的纯化

摘要

制备了抗六聚组氨酸(6×Histidine,6×His)多克隆抗体,以金磁微粒为载体对其进行纯化得到了高纯度的抗6×His抗体.首先以EDC法制备出六聚组氨酸-血蓝蛋白(6×His-KLH)抗原并免疫家兔,得到的抗血清经初步纯化,采用ELISA法测定其效价;为去除多克隆抗体中抗KLH抗体,将表面固定有KLH的金磁微粒(金磁微粒-KLH)与多克隆抗体反应,抗KLH抗体通过抗原抗体反应被吸附在金磁微粒表面,磁性分离取上清,利用ELISA法对去除前后抗6×His及抗KLH抗体的效价进行测定,确定出最佳去除条件.实验表明,初步纯化的多克隆抗体中抗6×His抗体效价可达1∶20 000;金磁微粒表面KLH固定化容量可达700μg/mg,当金磁微粒表面KLH与多克隆抗体质量比为50∶3时,金磁微粒-KLH可有效地去除多克隆抗体中抗KLH抗体,去除效果较好,说明所采用的方法成功制备出了高效价的抗6×His多克隆抗体;金磁微粒-KLH可特异性去除多克隆抗体中抗KLH抗体,得到高纯度的抗6×His的抗体,为研究6×His融合蛋白纯化检测奠定了基础.