GABA_B受体蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及复性

摘要

在大肠杆菌中培养含有pET28c质粒的BL(DE3),1 mmol.L-1IPTG诱导表达,收集包涵体蛋白,对其进行初步洗涤纯化,然后用8 mol.L-1尿素溶解,在变性条件下(8 mol.L-1尿素)经镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化,得到的电泳纯的蛋白,纯度可达95%以上。采用柱上复性的方法对包涵体蛋白进行复性,依次以含有6,5,4,3,2,1,0 mol.L-1尿素的Refolding buffer缓冲液洗柱,此方法可实现蛋白的同时纯化及复性。