miR-103a-3p对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及其作用机制

摘要

目的探讨miR-103a-3p对肝细胞癌(HCC)细胞迁移能力的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-103a-3p在正常肝细胞L02和HCC细胞系Hccl-M3中的表达;将Hccl-M3细胞按照实验要求分为A、B、C、D、E组,各组分别转染mimics NC、miR-103a-3p mimics、inhibitor NC、miR-103a-3p inhibitor以及miR-103a-3p mimics与TMEM166-Myc,采用Western blot方法检测miR-103a-3p对内质网跨膜蛋白TMEM166表达的影响;通过细胞划痕法检测miR-103a-3p表达对Hccl-M3细胞迁移能力的影响;通过micro-RNA靶基因数据库starBase预测miR-103a-3p与TMEM166可能的结合位点;将293T细胞分为F、G、H以及I组,各组分别转染mimics NC与TMEM166-3UTR-wt、miR-103a-3p mimics与TMEM166-3UTR-wt、mimics NC与TMEM166-3UTR-mu、miR-103a-3p mimics与TMEM166-3UTR-mu,检测每组细胞中荧光素酶活性,分析miR-103a-3p对TMEM166的靶向调控作用。结果RT-qPCR法检测结果显示,HCC细胞系Hccl-M3中miR-103a-3p的表达高于正常肝细胞L02(t=13.49,P<0.05)。Western blot检测结果显示,组间细胞TMEM166蛋白表达水平比较差异有显著性(F=276.20,P<0.05);B组细胞TMEM166蛋白表达水平低于A组(t=22.33,P<0.05),D组细胞TMEM166蛋白表达水平高于C组(t=9.72,P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,组间细胞荧光素酶活性比较差异有显著性(F=122.90,P<0.05),G组细胞荧光素酶活性显著低于F组(t=23.17,P<0.05)。划痕实验结果显示,组间细胞迁移率比较差异有显著性(F=16.83,P<0.05);B组细胞迁移率明显高于A组(t=4.13,P<0.05),D组细胞迁移率明显低于C组(t=4.33,P<0.05),E组细胞迁移率明显低于B组(t=4.91,P<0.05)。结论miR-103a-3p通过抑制TMEM166的表达促进HCC细胞系Hccl-M3的迁移。