内质网蛋白TMEM166对MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激的影响及其机制

摘要

目的借助1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP^(+))诱导的SH-SY5Y帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞模型,研究内质网跨膜蛋白166(TMEM166)对PD细胞模型氧化应激的影响及其机制。[HTH]方法[HTSS]将SH-SY5Y细胞分为A、B、C、D、E、F组,A~C组分别用0、1.0和1.5 mmol/L的MPP^(+)各处理24、48、72 h;D、E组分别转染Myc-TMEM166质粒和Myc空质粒,再用1.0 mmol/L MPP^(+)处理24 h;F组转染Myc-TMEM166质粒后,再用1.0 mmol/L MPP^(+)和1.0 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)共处理24 h。采用CCK-8法检测细胞相对活力,采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS生成情况,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞TMEM 166 mRNA的表达水平,采用蛋白质印迹(Western blot)实验检测细胞中TMEM166蛋白及自噬相关蛋白p62和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平。[HTH]结果[HTSS]B、C组SH-SY5Y细胞在不同时间的相对细胞活力比较具有显著差异(F=58.56、35.81,P<0.05);在同一时间点,各组细胞的细胞相对活力比较也有显著差异(F=21.56~45.16,P<0.05)。MPP^(+)处理24 h后,A、B组SH-SY5Y细胞ROS生成水平比较有显著差异(t=25.94,P<0.05)。随着MPP^(+)处理浓度增高,A~C组细胞中TMEM166蛋白表达水平逐渐下降(F=290.80,P<0.05),而TMEM 166的mRNA水平逐渐升高(F=315.20,P<0.05)。D组和E组相比,MPP^(+)处理导致的SH-SY5Y细胞ROS生成水平、细胞相对活力、p62蛋白水平和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平有显著差异(t=2.91~6.69,P<0.05)。与D组相比,F组SH-SY5Y细胞中ROS生成明显减少(t=3.91,P<0.05)。[HTH]结论[HTSS]TMEM166可能通过增强自噬加重MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激。